电镜样品的基本制备技术之负染色技术.pptxVIP

第五章 电镜样品的基本制备 第二节 负染色技术 负染色又称阴性反差染色，它是利用高密度的、且在透射电镜下又显示结构的重金属盐（如磷钨酸、醋酸铀等），把生物标本包围起来、在黑暗的背景上显示出呈现阴性反差样品的微细结构。所以负染色所显示的电镜图像，正好与超薄切片正染色相反，其样品结构为透明浅色，而背底则为无结构的灰色或黑色。对于负染色的机制，目前还不够清楚。 负染色技术首先，由Ha11（1955）、Hux1ey（1957）等人所采用，在后来的生物学研究中得到了越来越广泛的应用。负染色样品不需经过固定、脱水、包埋和超薄切片等复杂操作，而是直接对沉降的样品匀浆悬浮液进行染色。与超薄切片技术相比，该技术具有操作简便、用药量极少、省时快速及分辨力高等优点，现广泛用于细菌、病毒、大分子结构、亚细胞碎片及分离的细胞器等研究工作。 特别是在病毒学领域，负染色更能发挥其独到作用，是一项很重要的实验技术。 —、负染样品的制备 负染色所用的样品，全部取自悬浮液。在这种悬浮液中样品必须达到一定的浓度和纯度，这样才能与染色剂之间产生特异和清晰的结合反应。操作时，将带有样品的悬液，滴于带有支持膜的铜网上，染色处理后即可进行电镜观察。其全部制备过程分述于下。 （—）浓缩取样法