葡聚糖凝胶离子交换剂.pptVIP

英国的称为Sagavac，又分为Sagavac 2F，4F，6F，8F，10F和2C，4C，6C，8C，10C。前面的阿拉伯数字表示凝胶中干胶的百分数，F代表粉末状，C代表颗粒状。 丹麦的称为Gelarose，有5种类型，即2％，4％，6%，8％和10％。 琼脂糖凝胶做成珠状后不再脱水干燥，否则不能再溶胀恢复原有形状，因此商品大都以含水状态供应，并应在湿态保存。一般悬浮在l0-3 mo1/L EDTA和0.02%叠氮化钠溶液中。百分数表示干胶量。 G-75凝胶处理 称7克G-75凝胶，溶于0.025mol/LKCl-0.2mol/LHAC buff 300mL中，然后在100℃水浴上加热2-3h,冷却至室温后装拄。 * * 凝胶层析法 思考题（课前设疑） 3.膜分离技术的原理是什么？它同一般的透析方法相比有何特点？ 1.层析分离技术包括哪些技术？分别叙述凝胶层析、离子交换层析、亲和层析、高压液相层析、疏水层析、聚焦层析的分离纯化原理。 2.一般在粗品制备阶段和精品纯化阶段分别应采用哪些层析分离技术？ 4.凝胶层析的应用范围有那几方面？ 5.凝胶层析有何优缺点？ 6.常用凝胶分那几类？分别叙述它们各自的应用范围及特点。 7.在实验中应如何选择凝胶与预处理？ 8.细粒凝胶柱流速慢，洗脱峰越窄，分辨率高，适用于什么产品多分离或分析？粗粒凝胶柱流速高，但洗脱峰平坦，分辨率低，适用于产品制备那个阶段的分离？ 9.什么是“类分离”和“分级分离 ”？ 10.在凝胶层析中要想得到好的层析结果应注意那些问题和采取那些措施？ 11.凝胶用过后，有那几种保存方法？ 12.葡聚糖凝胶离子交换剂，葡聚糖凝胶和离子交换剂有何异同及特点？ 凝胶层析（gel chromatography）常出现多种名称 ： 如凝胶过滤、分子筛层析、排阻层析、凝胶渗透层析等。 凝胶层析的定义： 凝胶是一种具有多孔、网状结构的分子筛。利用这种凝胶分子筛对大小、形状不同的分子进行层析分离，称凝胶层析 。 凝胶层析的应用范围： 凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、多肽、激素、多糖、核酸类等物质。分子大小彼此相差25%的样品，只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开。利用凝胶的分子筛特性，可对这些物质的溶液进行脱盐、浓缩、去热源和脱色。 凝胶层析的优点 凝胶层析具有设备简单、操作方便、分离迅速及不影响分子生物学活性等优点。目前已被广泛应用于各种生化产品的分离和纯化。 －、凝胶层析的基本原理 凝胶层析的原理 l 分子大小不同混合物上柱； 2 洗脱开始，小分子扩散进人凝胶颗粒内，大分子被排阻于颗粒之外；3 大小分子分开： 4大分子行程较短，已洗脱出层析柱，小分子尚在进行中 凝胶是一类多孔性高分子聚合物，每个颗粒犹如一个筛子。当样品溶液通过凝胶柱时，相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔而只能沿着凝胶颗粒间的孔隙，随着溶剂流动，因此流程较短，向前移动速度快而首先流出层析柱；反之，相对分子质量较小的物质由于直径小于凝胶网孔，可自由地进出凝胶颗粒的网孔，在向下移动过程中，它们从凝胶内扩散到胶粒孔隙后再进入另 一凝胶颗粒，如此不断地进入与逸出，使流量增长，移动速率慢而最后流出层析柱。而中等大小的分子，它们也能在凝胶颗粒内外分布，部分进入颗粒，从而在大分子物质与小分子物质之间被洗脱。这样，经过层析柱，使混合物中的各物质按其分子大小不同而被分离。 Vt=Vo+Vi+Vg Vt=πR2h V。简称为外水体积，Vo等于被完全排阻的大分子的洗脱体积。可以用一个已知相对分子质量远超过凝胶排阻极限的有色分子，如常用的蓝色葡聚糖-2000溶液通过柱床，即可测出柱床的外水体积Vo。 Vi简称内水体积，可由g·Wr求得（g为干凝胶质量，单位为g，Wr为凝胶吸水量，以mL／g表示）。Vi也可以从洗脱一种完全不受凝胶微孔排阻的小分子溶质（如重铬酸钾）的洗脱体积Ve计算，即 Ve＝Vo＋Vi 对某物质在凝胶柱内洗脱体积Ve、Vo和Vi之间的关系可用下式表示： Ve＝Vo＋Kd.Vi 式中Ve为脱体积，它包括自加入样品时算起，到组分最大浓度出现时所流出的体积。Kd为每个溶质分子在流动相和固定相之间的一个特定的分配系数，它只与被分离物质分子大小和凝胶颗粒内孔隙大小分布有关。Kd可