人精子CABYR寡聚化作用鉴定.docVIP

人精子纤维鞘多态性蛋白CABYR的寡聚化作用研究 李彦锋 1，何畏 2，梁培禾1，张军1，孙中义1，张勇1，王洛夫1，靳风烁1， Charles J. Flickinger 3, John C. Herr 3 1. 第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科, 重庆, 400042；2. 第三军医大学附属西南医院妇产科, 重庆, 400038；3.美国弗吉尼亚大学细胞生物学系避孕和生殖健康研究中心, Charlottesville, VA 22908, USA [摘要] 目的 钙结合酪氨酸磷酸化调节蛋白（Calcium-binding tyrosine phosphorylation-regulated protein ，CABYR) 是一种高度多态性，具有钙结合能力，可被酪氨酸以及丝氨酸/苏氨酸磷酸化并参与获能的精子纤维鞘蛋白。本研究的目的是验证CABYR不同异构体之间寡聚体的形成。方法 人精子提取物进行非还原和还原条件下的SDS，二维IEF/SDS，对角线电泳，二维 blue native/SDS电泳和免疫印迹分析。结果 在人精子中丰度最高的CABYR亚型是分子量86kDa仅含CRA编码区表达序列，具有钙结合能力的异构体。 同时也存在既含CRA又CRB编码区表达序列的CABYR亚型。在非还原条件下，丰度最高的~130kDa二聚体是由仅由仅含CRA表达序列的86kDa异构体和既含CRA又含CRB表达序列的50kDa异构体组成。 ~200-220kDa寡聚体是由86 kDa，50kDa异构体，以及35kDa (可能既含CRA又含 CRB表达序列)的异构体和仅含CRA表达序列的30kDa异构体组成。 结论 本研究首次证实CABYR异构体可形成寡聚体，CABYR 主要通过86kDa和50kDa异构体形成异质二聚体，与其它CABYR异构体结合进一步形成更大的寡聚体，参与了人精子纤维鞘超分子结构的装配和形成。 [关健词] CABYR; 精子；纤维鞘; 寡聚化作用; 多态性 本研究获得美国Fogarty国际中心 D43 TW/HD 000654基金和第三军医大学回国人员启动基金资助。 Self-assembly of CABYR by oligomerization in human sperm fibrous sheath Yan-Feng Li 1, Wei He 2, Pei-He Liang1，Jun Zhang1，Zhong-Yi Sun1，Yong Zhang1，Luo-Fu Wang1，Feng-Shuo Jin1，, Charles J. Flickinger 3, John C. Herr 3 1 Department of Urology, Third Affiliated (Daping) Hospital, Research Institute of Surgery, Third Military Medical University, Chongqing 400042, China. 2 Department of Obstetrics and Gynecology, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China. 3 Center for Research in Contraceptive and Reproductive Health, Department of Cell Biology, University of Virginia, P.O. Box 800732, [Abstract] Objective CABYR is a highly polymorphic, calcium-binding tyrosine, as well as serine/threonine, phosphorylated fibrous sheath (FS) protein involved in capacitation. The objective of this study was to test the hypotheses that CABYR variants oligomerize and participate in the assembly of FS. Methods Different human sperm extracts were used for SDS, 2D IEF/SDS, 2D diagonal gel electrophoresis and 2D blue native/SDSin native or non-reducing condition a