GB/T 23239-2009伊氏锥虫病诊断技术.pdf

ICS 11.220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 23239—2009 伊氏锥虫病诊断技术 Diagnostic techniques for Trypanosomosis evansi 2009-03-09 发布 2009-05-01 实施 发布 GB/T 23239—2009 刖 本标准的制定参照了世界动物卫生组织（OIE）编写的 《陆生动物诊断试验和疫苗手册 （哺乳动物、 禽鸟与蜜蜂）》 （第五版,2004）。 本标准的附录A 、附录B和附录C为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位 ：中国农业科学院上海兽医研究所。 本标准主要起草人：周金林、沈杰 T GB/T 23239—2009 伊氏锥虫病诊断技术 1范围 本标准规定了新鲜血片、薄血涂片染色、毛细管集虫、实验动物接种等病原鉴定方法和乳胶凝集试 验、间接血凝试验和酶联免疫吸附试验等血清学试验技术。 本标准适用于伊氏锥虫病的诊断、检疫、流行病学调查。 2临床诊断 依家畜种类不同，临床症状表现不同 。马 （骡、驴）一般呈急性经过，感染后，体温突然升高到40 C 以上，稽留数日，而后经短时间的间隙，再行发作，体表水肿为常见症状，结膜和第三眼睑常有出血斑。 黄牛、水牛及骆驼等一般呈慢性经过，有不定期的间歇发热 ，食欲不振 ，消瘦，肿脚和耳、尾干枯症状，许 多慢性感染病例无明显病变。 有以上临床症状者，可以怀疑感染，确诊需要实验室检验。 3病原鉴定 3. 1采血样 可从耳静脉或尾静脉采取外周血，从颈静脉或其他大静脉采取深部血液，因伊氏锥虫喜欢寄生于深 部血液，处于低虫血症时，外周血检出率常低于深部血的50%。 3.2新鲜血片检查 在干净载玻片上滴上一小滴鲜血，盖上盖玻片，使血液扩散成为细胞单层 ，再用光学显微镜 （200倍） 观察活动锥虫 。为防止血液在观察时干涸，也可先在载玻片滴血吋加一滴生理盐水或3%柠檬酸三钠 生理盐水。 3.3薄血膜染色检查 将一小滴血放在清洁载玻片一端约20 mm处，按常用方法推成薄血膜，迅速风干，用甲醇固定 2 min,干燥后，再加姬氏染色液（配法参见附录A）染色25 min,倾去染色液 ，自来水冲洗，干燥后用 400倍〜1 000倍显微镜检查。 3.4毛细管集虫检查 3.4. 1材料准备 肝素处理过的毛细管（管内径1.5 nrni,长75 mm的玻璃或无色透明的硬质塑料管，在拟进血的一 端吸入3%肝素钠10 rmn,用烤箱70 €-80 C烤干后备用），显微镜一台，离心机一台，载玻片，盖玻 片，12号以上注射针头（或金属针），塑泥 （橡皮泥）。 3.4.2采集待检血样 从动物耳静脉或尾静脉穿刺获得血液 。先用酒精棉擦净拟采血处皮肤，干后用针头穿刺血管，血流 出吋用毛细管吸入达40 rmn深 （即70卩L血），封闭未沾染血的另一端 （可用塑泥或火焰加热封闭）。 3.4.3集虫 以3 000g离心10 min,待红细胞全部沉积于毛细管下半部，上层为黄色血浆时即可。 3. 4. 4 检查 在毛细管的血浆与红细胞分界线下1 nwi处将管折断 （切断、剪断），将带有少量红细胞的血浆滴于 载玻片上，盖上盖玻片，使血液扩散成细胞单层 。在350倍〜400倍放大的光学显微镜下检查活锥虫， 如需进一步详