马来酰亚胺连接子的合成及其在核酸给药体系中的应用-化学生物学专业论文.docxVIP

摘要摘 摘要 摘 要 RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指细胞水平上由双链RNA诱发的 基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。当 细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而 导致基因沉默。 虽然RNA干扰现象从发现到现在才短短十余年，但因为其在基因沉默方面 具有沉默效率高和操作简单等优点，已经成为基因功能研究的重要工具。并且 由于这些优点以及其独特的作用机制，RNA干扰技术已经成为研究细胞信号传 导通路与基因治疗的新手段。尽管RNA干扰技术的发现令人兴奋，但是在将RNA 干扰真正应用于临床治疗之前还有许多困难必须克服，其中包括脱靶效应，免 疫反应，在血浆和血清中的稳定性以及给药途径等。为了解决这些问题，对于 RNA delivery system的设计逐渐成为研究重点。我们利用快速定量的巯基迈克 尔加成反应，设计了一系列可以用于修饰的双端马来酰亚胺linker，利用此类 linker与巯基迈克尔加成的快速定量特性，可以广泛应用于RNA的修饰。并且由 于反应的普遍适用性，这种linker还可以继而用于各种含有巯基的生物大分子的 交联。通过双端取代基的灵活控制可以使linker在与不同巯基分子的交联过程中 利用其动力学差异产生区域选择性。 在生物交联的反应中，氨基和巯基的交联反应应用同样的广泛。这两种基 团大量纯在于多肽，蛋白等生物大分子中，且可以通过固相合成方便的引入核 酸末端。设计一种可以普适性地连接含巯基和氨基生物大分子的linker对于 siRNA delivery system设计是十分有意义的。本文的第二部分工作就设计了这 样一种linker分子，利用酰胺化和迈克尔加成反应，连接蛋白分子和siRNA，以 解决siRNA delivery system的靶向性问题。 关键词：RNA干扰，连接子，siRNA载药系统，巯基迈克尔加成，靶向性 AbstractAbstract Abstract Abstract RNA interference(RNAi)is the gene silencing induced by double·stranded RNA(dsRNA)of molecular biology．The mechanism is blocking the translation or transcription of specific genes to inhibit gene expression．During gene silencing by RNAi，double．stranded RNA(dsRNA)guides the degradation of mRNAs that are homologous in sequence to the dsRNA． Although there are only about ten years since the discovery of RNAi，RNAi has become all important tool for gene function studies because of its high efficiency and simplicity in gene silencing．For these advantages，it has become a new method in the study of cellular signaling pathways and gene therapy．Despite the excitement about the discovery of RNAi technology，there are a number of hurdles and concerns that must be overcome prior to making RNAi a real therapeutic modality，which include off-target effects，triggering of type I interferon responses，stability in plasma and serum and effective delivery in vivo．In order to solve these problems，design and modification of the RNA delivery are becoming research priorities．We design a series of 1inker for linkage and modification with fast and eff