第一章 环境监测中的微生物学方法.ppt

第一章 环境监测中的微生物学方法 当环境受到污染后，环境的 物理性质 化学性质 生物学特性 如： 重金属离子、NO3- 浓度增加； 水体污染变质，水生生物种类减少，甚至灭绝； 如何监测？ 化学方法：快速、定性定量反映污染物浓度，但为瞬时值； 生物学方法：利用生物种类、数量的变化，生物学特性的改变来监测污染物对环境的影响。 可监测到污染物对环境的综合影响，但不易精确反映污染物的性质、浓度和数量。 第一节 空气的卫生学检验 一、空气微生物来源 空气并非微生物的繁殖场所，空气中缺乏水分和营养，紫外线的照射对微生物也有致死作用。 土壤中飞扬起来的灰尘； 水面吹起的水雾、人和动物体表干燥脱落的物质，微生物附着于这些物质的微粒上随气流传播。 微生物产生的孢子本身也可以飘浮到空气中，形成 “气溶胶”，借风力传播。 空气中的微生物中，真菌的孢子数量最多，细菌较少。而且藻类、酵母菌、病毒都会存在于空气中 。 二、空气微生物的卫生标准 目前，还无统一的关于空气的卫生学指标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为50~1,000个以上作为空气污染的指标。 病原菌在空气中一般很易死亡，但结核菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓灰质炎病毒等，也可以在空气中存活一段时间。 尘埃多的地方，如畜舍、公共场所、医院、城市街道的空气中，微生物数量较多。高山、海洋、森林、积雪的山脉和高纬度地带的空气中，微生物较少。 三、空气的微生物监测 通常采用营养琼脂平板计数法。 我国检测空气微生物所用的培养皿直径为d90mm，有用d100mm的。 评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。测定的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌，在必要时则测病原微生物。 (一)空气微生物的测定方法 1．固体法 固体法有平皿落菌法(沉降—平板法)、撞击法(有缝隙采样器、筛板采样器、针孔采样器)和过滤法。 (1)平皿落菌法：将营养琼脂培养基融化倒人d90mm无菌平皿中制成平板。将它放在待测点(通常设5个测点)，打开皿盖暴露于空气5~10min，以待空气微生物降落在平板表面上，盖好皿盖，置于培养箱中培养48h后取出计菌落数，即为落菌数。 可通过前苏联奥梅梁斯基公式换算出浮游细菌数。 奥氏认为：5 min内落在面积100mm2营养琼脂平板上的细菌数和10L空气中所含的细菌数相同。 奥氏公式： 式中：C—空气细菌数； A——捕集面积，cm2 ； t ——暴露时间，min； N——菌落数，个。 简化后的奥氏公式： 经测定发现，用奥式公式计算的浮游细菌数比实测的浮游细菌少。 此公式没有考虑尘埃粒子大小、数量、气流情况、人员密度和活动情况。 (2)撞击法： 以缝隙采样器为例，用吸风机或真空泵将含菌空气以一定流速穿过狭缝(狭缝宽有0.15 mm、0.33 mm和1 mm三种)而被抽吸到营养琼脂培养基平板上。狭缝长度为平皿的半径，平板与缝的间隙有2mm，平板以一定的转速(1 r／min、5-60r／min、60r／min)旋转。 撞击法检测空气中微生物数量 2 液体法 液体法用于测定空气中的浮游微生物，主要是浮游细菌。该法将一定体积的含菌空气通入无菌蒸馏水或无菌液体培养基中，依靠气流的洗涤和冲击使微生物均匀分布在介质中，然后取一定量的菌液涂布于营养琼脂平板上，或取一定量的菌液于无菌培养皿中，倒入15-18ml融化(45℃)的营养琼脂培养基，混匀，待冷凝制成平板，置于37℃恒温箱中培养48h，取出计菌落数。 再以菌液体积和通入的空气量计算出单位体积空气中的细菌数。 例如：将10m3含菌空气通入100mL的无菌水中，使10m3空气中的微生物全部截留在100mL水中。然后取0.1 mL菌液涂布于平板上，若长出100个菌落，10mL水中共含菌10,000个，则10m3空气含有10,000个。1m3空气含有1,000个 。 (二)空气微生物的检测点数 空气微生物的测点数越多越准确，为照顾到工作方便，又相对准确，以20~30个测点数为宜，最少测点数为5~6，见表。 表2.2 按美国联邦标准209E方法计算的必要测点数 表2.4 落菌法测细菌所需要的最少培养皿数(沉降0.5h) 第二节 水质的细菌学检验 一、细菌总数 是将定量水样（原水样或经一定稀释后的水样1mL）接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上，于37oC培养24hr后观察结果，计算细菌菌落数，最后算出原水样每毫升的细菌总数。 具有相对的卫生学意义，菌数越高，反映出水体受有机物污染或粪便污染越重，病原菌污染的可能性亦大。 二、粪便污染指示