2010年版中国药典微生物培训药品微生物检验技术基础操作规范.pptVIP

药品微生物检验技术基础操作规范 2010年06月 微生物检验是一门微生物应用技术，也是一门综合的专业技术。它包括的范围非常广泛；基本分为；无菌技术和微生物检验技术两大类。 一、无菌技术 1、 无菌技术概念 2、无菌环境 ⑴无菌室 ⑵无菌器材 3、无菌操作 无菌操作一般是指在无菌环境条件下，使用无菌器材进行检验，可保证检验物品不被二次污染、保证试验结果的真实性及检验人员的安全。无菌操作涉及的方面很广，现简述如下： ⑴试验前准备 消毒(工作台面和地面) ↓ 进行空间灭菌处理(开启净化系统和紫外线灯 ↓ 试验器具与供试品进入无菌室(通过物流) ↓ 操作人员进入第一缓冲间(洗手、消毒液消毒手) ↓ 操作人员进入第二缓冲间(穿戴无菌工作服、鞋、帽、口罩) ↓ 操作人员进入无菌室 ↓ 点燃酒精灯，消毒液的棉球消毒手 ↓ 进行试验操作。 ⑵检验操作规程 ①试验全过程应在近火焰处操作，动作要轻。 ②标记 ③使用接种环（针），灼烧灭菌。 ④用吸管吸取供试液或培养液等，用橡胶乳头吸取。 ⑤用过的玻璃器皿应立即放入消毒液缸（桶）内进行灭菌。 ⑥用注射器吸取供试品或培养物时，注射器内应无空气，从密封容器内抽取液体时，应通过火焰注入无菌空气。 ⑦在开启菌种管或其他供试品安瓿之前，应用碘伏溶液、碘酒棉球消毒容器。刻痕用的砂轮、锯刀也应消毒，截断时要防止污染，安瓿切口通过火焰灭菌。 ⑧在接种霉菌、放线菌时，应在铺有浸过消毒液的湿纱布上操作，以防孢子散落传播。 ⑨试验时使用的培养皿打开盖时开口朝向火焰，不得将盖放工作台上，拔出玻璃容器塞子时应用小指夹住塞子拔出，不得将塞子放在工作台上，以免造成污染。 ⑩在实验过程中观察平板培养物时，一般不宜开盖观。如取菌落或菌苔涂片、染色，或做玻片凝集实验时，在近火焰处操作，平皿盖可适当开启（45°），开口朝向火焰，挑取菌落。 ⑩在涂片、染色时．应使用夹子夹持载玻片，切勿用手直接拿载玻片，用过的玻载片和盖玻片应置消毒液中消毒后，洗刷清洁的器皿经消毒后再洗刷，放置固定处，备用。 二、微生物检验操作技术 接种、分离、培养是微生物检验工作中应用最多的基本操作技术。 1、接种技术 接种方法有多种，根据接种的菌株不同所使用的培养基也不同，接种时经常使用接种环、接种针、无菌吸管或无菌注射器等。 ⑴接种方法 斜面培养基接种法 适用于纯培养、扩大培养及短时间保存菌种。 2、分离技术 使用平板培养基进行分离达到分离出单个菌落的目的，以供微生物的鉴别、纯菌的保留，分离的方法有多种，常用的方法如下： ⑴划线分离法 ⑵倾注分离法 ⑶涂布分离法 3、培养方法 细菌培养，要掌握温度、湿度、时间、环境等因素，《中国药典2010版》规定微生物限度检验细菌培养温度为30~35℃，此温度适于中温菌生长，某些高温菌在该温度下也可以生长。药品污染的控制菌多是中温