实验三-双抗夹心ELISA法检测IL.docVIP

实验三 双抗夹心ELISA法检测IL-1 白细胞介素-1（IL-1）是一种单核因子，主要由单核细胞-巨噬细胞、上皮细胞以及树突状细胞分泌。它可以促进多种细胞增殖和活化，对免疫应答有重要的调节作用，也被称为淋巴细胞激活因子或内源性热原质等。本实验采用双抗加薪ELISA法检测人血清中的IL-1浓度，将标准品、待测样本加入到预先包被人IL-1单克隆抗体的酶标板中，洗涤除去未结合的成分，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人IL-1抗体，它将与人IL-1结合而形成免疫复合物，最后加入底物（OPD）显色，其颜色深浅（450nm波长下测定OD值）与样品中人IL-1浓度呈正相关。 【试剂与器材】 预包被的酶标板，HRP标记的抗人IL-1抗体、重组IL-1标准品、待检样品、样品稀释液；洗涤液、显色液（含底物及酶反应体系）、终止液；37度恒温水浴锅、酶标仪、微量加样器、一次性吸头、吸水纸等。 【方法】 吸取包被抗体加入凹孔板中，每孔200微升，将凹孔板置于湿盒中，与37度作用1-2个小时候，再置40度冰箱过夜，从冰箱取出凹孔板，帅弃孔中液体，注满洗涤液、甩干，如此重复3次，拍干备用。 加标准品和待测样本：分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，标准品孔中加入标准品50微升，待测样本孔中加入血清10微升，再加样本稀释液40微升，空白对照孔。。。标准稀释液，加入相应试剂200微升/孔。 37度中