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- 2019-06-19 发布于四川
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- | 2012-12-31 颁布
- | 2013-06-01 实施
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ICS 65. 020. 01 ——_ —
B 16 G 目
中华人民共和国国彖标准
GB/T 28981—2012
齿兰环斑病毒检疫鉴定方法
Detection and identification of odontoglossum ringspot virus
2012-12-31 发布 2013-06-01 实施
GB/T 28981—2012
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本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草。
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫
局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。
本标准主要起草人:闻伟刚、陈先锋、杨翠云、郭立新、鲁洁、张永江、张明哲、徐瑛、崔俊霞、张慧丽。
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GB/T 28981—2012
齿兰环斑病毒检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了齿兰环斑病毒血清学和分子生物学特征的检测方法。
本标准适用于种子 、种球、花卉和种苗等植物材料中齿兰环斑病毒的检测,也适用于蛭虫等传播媒
介中该病毒的检测。
2 齿兰环斑病毒基本信息
中文名:齿兰环斑病毒
学 名:odontoglossum ringspot virus
缩写:ORSV
属烟草花叶病毒属{Toba 1 novirus),齿兰环斑病毒其他信息参见附录Ao
3方法原理
利用基于抗原抗体反应的双抗夹心酶联免疫吸附测定 (Double antibody sandwich enzyme-linked
immunosorbent assay, DAS-ELISA) 、体外DNA合成技术的反转录聚合酶链式反应(Reverse
transcription polymerase chain reaction, RT-PCR ) 、实时荧光反转录聚合酶链式反应 (real-time
fluorescent RT-PCR)进行检测鉴定。
4仪器设备、用具和试剂
4. 1仪器设备
PCR仪、实时荧光PCR仪、超净工作台、电子天平(感量:0.001 g) 、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、
高速冷冻离心机、超低温冰箱 (一80 °C )、高压灭菌锅、小型食品加工机、微波炉、酶标仪。
4.2用具
可调式微量移液器(2 mL,10 mL.100 “L 、200 yL 、l 000 卩L 、5 000 卩L)及相应的无RNase吸头、无
RNase离心管、PCR管和研钵等。
4. 3试剂
主要试剂和缓冲液见附录B和附录C。
5检测
5. 1样品制备
取0.5 g〜10 g种子、种球鳞片或畸形、变色症状的叶片等植物组织,在研钵或小型食品加工机中
1
GB/T 28981—2012
充分研磨,取五分之一量的均匀后样品,转入离心管中,
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