GB/T 35336-2017苹果皱果类病毒检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 B 16 £3© 中华人民共和国国家标准 GB/T 35336—2017 苹果皱果类病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Apple f ruit crinkle viroid 2017-12-29 发布 2018-07-01 实施 发布 GB/T 35336—2017 S 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人:邓丛良 、赵晓丽 、吕玉峰、梁新苗、骆卫峰、郑春生、张永江。 I GB/T 35336—2017 苹果皱果类病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了苹果皱果类病毒的检疫鉴定方法。 本标准适用于可能带有苹果皱果类病毒的植物材料的检测鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3苹果皱果类病毒基本信息 学名:Apple fruit crinkle viroid。 缩写:AFCVdo 分类地位：马铃薯纺锤块茎类病毒科CPos/jiviroidae）、苹果锈果类病毒属^A/jscaviroid ）。 苹果皱果类病毒的其他信息参见附录A。 4方法原理 类病毒检测主要针对其核酸序列 。主要的方法有RT-PCR和核酸分子杂交。 5仪器设备、主要用具和主要试剂 5.1仪器设备 电子天平（感量0.001 g）、普通天平 （感量0.1 g） 、高速冷冻离心机、小型瞬时离心机、普通冰箱、超 低温冰箱 （一80 °C ）、制冰机、涡旋振荡器、磁力搅拌器、高压灭菌锅、pH计、PCR仪、微波炉 、电泳仪、电 泳槽、凝胶分析成像系统、实时荧光PCR仪、杂交炉、塑料薄膜封口机 、紫外交联仪、暗箱、摇床、恒温水 浴锅、组织破碎仪等。 5.2主要用具 可调移液器 2.5 ”L 、10 卩L 、20 卩L 、200 #L 、1 000 卩L 、5 000 卩L）、无 RNA 酶吸头 （10 ”L 、20 “L、 200卩L 、1 000 4、5 000 #L）、无RNA酶离心管 （1.5 mL 、5 mLJO mL ）、研钵、研棒、磁性分离架、PCR 反应管 （200 “L）、实时荧光96孔反应板、杂交瓶、杂交膜、杂交袋、X光片。 5.3主要试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯 ，实验用水应符合GB/T 6682中相关规定 。RT-PCR检测试 剂见附录B；实时荧光RT-PCR检测试剂见附录C；斑点杂交检测试剂见附录D。 1 GB/T 35336—2017 6检测与鉴定 6.1普通RT-PCR检测方法 普通RT-PCR检测方法见附录B。