GB/T 33127-2016甘蔗线条病毒检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 中华人民共和 国 国彖标准 GB/T 33127—2016 甘蔗线条病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Sugarcane streak virus 2016-10-13 发布 2017-05-01 实施 GB/T 33127—2016 ■ i r ■ ■ i 刖 吕 本标准按 GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国海南出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人:冯黎霞、武目涛、刘福秀、赵立荣、王卫芳、杨雷亮。 T GB/T 33127—2016 甘蔗线条病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了甘蔗线条病毒的检疫鉴定方法。 本标准适用于可能带有甘蔗线条病毒的活体寄主植物的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件 ，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T 1840植物病毒免疫电镜检测方法 SN/T 2122进出境植物及植物产品检疫抽样 3甘蔗线条病毒基本信息 中文名：甘蔗线条病毒。 学名：Su^arcane streak virus。 缩写:ssvo 分类地位:双生病毒科(Geminiviridae)，玉米线条病毒属(Mastrexii rus ) 0 甘蔗线条病毒的其他信息参见附录A。 4方法原理 SSV的免疫原性和基因组特征是该病毒检疫鉴定的依据 。利用常规PCR 、实时荧光PCR 、双抗体 夹心酶联免疫吸附测定(DAS-ELISA)和免疫电镜方法对样品进行检测。 5仪器设备、设施、用具和试剂 5.1仪器 电子天平(感量0.001 g)、高速离心机、小型瞬时离心机、超低温冰箱(一80 °C) 、制冰机、涡旋振荡 器、磁力搅拌器、高压灭菌锅、pH计、透射电子显微镜、超净工作台、PCR仪、实时荧光定量PCR仪、微 波炉、电泳仪、电泳槽、凝胶成像分析仪、酶联检测仪。 5.2设施 隔离温室(10 °C-30 °C)。 5.3用具 酶联板、可调移液器(2.5 yL 、10此、20此、100卩L 、1 000 卩L)和可调移液器头、离心管、研钵、微型 1 GB/T 33127—2016 磨杵等。 5.4试剂 除有特别说明外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682中相关规定 。DAS-ELISA测 定试剂见附录B；PCR检测试剂见附录C； 实时荧光PCR检测试剂见附录D。 6症状观察与抽样 6.1症状观察 现场检疫主要观察植物材料上病毒为害的症状,SSV为害症状描述参见附录A。 6.2抽样 发现有病毒为害症状的植物材料直接送检 ；未发现症状的，则按SN/T 2122中规