分子遗传学第四章-基因操作.pptVIP

第四章 基因操作Gene manipulation 第二节 限制性内切酶 一、宿主限制现象 第三节 重组DNA 在细菌细胞中选择性地扩增特定DNA片段的过程称分子克隆（molecular cloning）。 第四节 重组DNA方法学 第五节 DNA序列分析 DNA序列分析是最终了解基因结构和组成的重要工具,在人类基因组计划中测定人基因组的全部核苷酸序列是该计划的核心。1977年Sanger发明了以双脱氧核苷三磷酸（2’3’ddNTPs）作为DNA合成终止剂的“末端终止法”，开创了基因核苷酸序列测定的先河，最早完成了Φ×174全部序列的测定。 为此Sanger第二次获得诺贝尔奖。 第六节 基因工程 由基因工程方法产生的生物称为转基因生物，它一般是指由导入外源DNA的细胞发育而成的生物。 第七节 遗传病——基因诊断和基因治疗  生命伦理学进入大学课堂 随着生命科学和医学的发展，生命伦理问题必定会越来越突出、越来越重要。这是不可抗拒的文化潮流，也是社会文明进步的重要表现。 新世纪的教育必须适应这一趋势。 学习生命科学和医学的大学生、研究生，是否具有生命伦理的理念和知识，至为关键，是他们专业知识的重要组成部分。 非生物专业的学生，学习生命伦理学，对于培育他们以人为本的理念和情怀，尊重生命、关爱生命，也大有助益。 （AD） （XR） （线粒体病） 遗传服务中应遵循的伦理学原则 遗传服务的四大伦理原则 尊 重 自 主 行 善 无 伤 害 公 正 产前诊断中涉及道德问题上的4项基本准则 尊重夫妇双方的选择 对个人和家庭不产生伤害 产前诊断的结果可靠 产前诊断和遗传咨询的自愿性 二、基因治疗（gene therapy） 人类的遗传性疾病治疗的常规方法：（1）手术治疗，如先天性心脏病通过手术加以矫正.（2）药物治疗，如生长激素缺乏症（侏儒）可注射人生长激素等。 □基因治疗定义：应用基因工程手段用正常基因导入基因有缺陷的靶细胞中，使正常基因表达，并合成相应的产物，使细胞恢复正常的功能，使疾病得到治疗。 □基因治疗的类别：根据基因转移到受体细胞的不同，可分为体细胞基因治疗和生殖细胞基因治疗。 （1）．体细胞基因治疗：将正常的外源基因导入到患者特定的体细胞中，并使其正常表达，合成患者所缺的某种蛋白质或酶，使患者的症状得以改善。 （2）．生殖细胞基因治疗：将正常基因导入患者的生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞中，使这类细胞中的某些异常基因的功能得以恢复，最终发育成正常个体。 1. 基因治疗方法和步骤 ?(1)．通常将正常的基因首先与基因转移的载体相连接，常采用的载体有反转录病毒载体和腺病毒载体。 (2)．将患者的体细胞（称靶细胞）作体外培养，常用的有T淋巴细胞，骨髓干细胞，皮肤成纤维细胞、肌细胞、肝细胞等 (3)．外源基因的转移，将外源基因通过载体导入到靶细胞中，常用转染的方法（加入磷酸钙）导入到细胞中，并与细胞中核DNA整合到一起，也可用重组病毒感染靶细胞转移外源基因。 (4)．对能正常表达目的基因的靶细胞作检定后回输到患者体内。 重症联合免疫缺陷（Severe combined immunodeficiency disease，简称SCID），患者缺乏正常人体免疫功能，其染色体上编码腺苷脱氨酶（简称ADA）的基因发生突变所致。由于ADA是嘌呤代谢中的一种酶，该基因缺陷将导致患者身体细胞中脱氧腺苷的累积，达到高浓度时脱氧腺苷将对免疫系统细胞（如T-细胞和B-细胞）产生毒性。 2.基因治疗实例 1990年，美国第一次对SCID病人作基因治疗，其步骤为： （1）．将正常ADA基因与反转录病毒载体相连，构建重组病毒表达载体。 （2）．从患体体内分离有免疫缺陷的T淋巴细胞。 （3）．用重组病毒感染体外培养的T淋巴细胞，使正常ADA基因插入到T淋巴细胞基因组中。 （4）．培养细胞并确认该基因正常表达。 （5）．将含有正常基因的T淋巴细胞回输到患者的骨髓组织中。经5-6个月的基因治疗，患者体内T淋巴细胞的数量恢复到正常水平，体内ADA酶几乎达到正常水平，免疫功能得到恢复。 Gene therapy for treatment of severe combined immunodeficiency (SCID), a fatal disorder of the immune system caused by absence of the enzyme adenosine deaminase (ADA) Ashanti DiSilva, the first person to be tre