课件：浸矿用细菌.pptVIP

2.3.2 浸矿细菌的培养 (一） 培养步骤 1)配好的培养基用蒸汽灭菌15min后，在无菌操作下分装于数个已洗净并灭菌的100mL三角瓶中。 2)每瓶装培养基20mL，用洗净干燥吸液管分别取1～5mL矿水样加到三角瓶中，塞好棉塞置于20～35℃恒温下，静置培养（或振动培养）7～10天。 3)细菌生长繁殖使三角瓶中培养基的颜色由浅绿变为红棕色，最后在瓶底出现高铁沉淀。  4)选择变化最快，颜色最深的三角瓶，在瓶中取1mL培养液，接种到装有新培养基的三角瓶中，同样培养。培养液将比头一次更快的变红棕色。 5)按同样办法反复转移培养10次以上。每转移一次只需1～2滴，接种量逐渐减少而所培养的细菌却越来越活跃，只需培养3～5天就可把培养基中的Fe2+氧化为Fe3+。 （二）培养目标 在转移培养中，借助培养基的高酸度，可杀死淘汰掉一些不嗜酸的杂菌，同时由于培养基中的高浓度亚铁离子，只有氧化亚铁的细菌才能生长繁殖，其他菌则被杀死淘汰掉，而氧化铁硫杆菌则得到充分繁殖，活性越来越大。 （三）浸矿细菌的培养基 液体培养基 由水和溶在水中的各种无机盐组成的，液体培养基用于粗略地分离培养某种微生物。 固体培养基 是在液体培养基中加入1.5%琼脂（洋菜）或一定量硅胶制成的。 方法：在加热条件下配成一定浓度的消毒琼脂溶液后，再加入无菌过滤的FeSO4等无机盐母液，用H2SO4调节好酸度，冷却至常温即制成固体培养基。 进行微生物的纯种分离则要用固体培养基。 常用培养基 1) 9K培养基:适用于培养氧化铁的喜中温细菌 ,其中 ρ((NH4)2SO4) = 3 g/L,ρ(KCl) = 0.1g/L, ρ(K2HPO4) = 0.5g/L,ρ(MgSO4·7H2O =0.5g/L, ρ(Ca(NO3)2 = 0.01g/L , ρ(FeSO4·7H2O) = 20 g/L。 2) 9K+ S 培养基:在 9K培养基的基础上加入一定量的硫粉 ,适用于培养氧化硫、氧化铁的喜中温细菌。 3) Waksman 培养基：适用于培养氧化硫的喜中温细菌，其中ρ((NH 4)2SO4) = 0.2 g/L , ρ(K2 HPO4)=3 g/L, ρ(MgSO4·7H2O)= 0.5g/L, ρ(CaCl2·6H2O) = 0.25g/L g/L, FeSO4·7H2 O痕量 , ρ(S0 )= 2g/L。 Microbio－hydrometallurgy 培养基的测定方法及监测目的 1.测定方法 用 EDTA 对 Fe3+、Fe2+ 连续滴定测定;用精密酸度仪测定培养基的pH值。 2.监测目的 pH是反应介质酸碱性的重要指标。硫杆菌具有将还原态的硫转化成硫酸的功能 ,其发育会改变介质原有的酸性条件。通过监测 pH 的变化,可以判断硫杆菌的发育情况。Fe2+向Fe3+的转化标志着铁杆菌的活性状况。 Microbio－hydrometallurgy （四）细菌的培养特征 Microbio－hydrometallurgy 菌落特征 Microbio－hydrometallurgy Microbio－hydrometallurgy 细菌的其他培养 液体培养 半固体培养 Microbio－hydrometallurgy （五）氧化铁硫杆菌的检查和鉴定方法 1)肉眼观察 如有该菌生长，则培养基中的亚铁将被氧化变成高铁，培养基的颜色由浅绿变成红棕色，最后产生高铁沉淀。 2)重铬酸钾容量法测定 测定培养液中亚铁变成高铁的数量。变化快的，说明细菌生长旺盛。3)显微镜观察 观察细菌的形成，是否具有氧化铁硫杆菌的形状特征。 说明：上述方法得到的菌种是不纯的，如要分离纯种，上述分离过程要无菌操作，并且要作平板分离。 （六）平板分离 方法 1) 把配制好的固体培养基倒入培养皿制成平板。 2)在无菌操作下，用接种环取上述培养菌液在平板上划线分离，使所取菌液中的菌体细胞尽量沿划线分散开。 3)将划好的线培养皿在25～30℃条件下恒温培养。 4)经10天左右，借解剖镜挑选适当菌落并用取样针转移到装有数毫升培养基的小试管中恒温培养，一般7天左右培养液就可变成红棕色。 5)将此培养液重新在固体培养基上划线分离，如此反复进行数次分离和培养，就可获得纯菌株。 （七）细菌生长曲线 细菌生长 分成四个时期 生长缓慢期 对数生长期 稳定生长期 衰亡期 说明： 以上是所有微生物生长繁殖所必须经历的四个时期，每个时期的长短和细菌的活跃程度受环境因素制约。 a. 生长缓慢期 当细菌由一个环境转移到一个新环境时，会出现一个逐步适应的缓慢生长期，细菌生长繁殖速度很慢，细菌也不活跃。根据被培养细菌对环境的适应性，这个