临床生物化学和生物化学检验06.pptVIP

第六章  诊 断 酶 学 [掌握]血清酶的分类、生理变异、病生机制等，同工酶及其亚型测定，临床诊断中常用的血清酶及其同工酶，重要血清酶的测定、原理及评价 。 [熟悉]酶的有关酶基本知识，酶活性浓度的测定技术及酶的免疫化学测定 。 2、连续监测法（动力学法、速率法） 四、工具酶 工具酶：酶学分析中作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性浓度的酶。 指示酶和辅助酶作为反应系统中的试剂。 （一）工具酶 （二）常用工具酶 常用工具酶多为氧化还原酶类 工具酶纯度不必要求过高 工具酶中杂质的含量有一定的限制 P152 （三）工具酶参与的指示反应 临床生化检验中，很多项目的测定往往使用有工具酶参与的类似的反应原理－－共通（通用）反应途径。 1. 偶联H2O2的工具酶及其指示反应 葡萄糖 尿酸 胆固醇 甘油 丙酮酸 葡萄糖氧化酶 尿酸氧化酶 胆固醇氧化酶 甘油氧化酶 丙酮酸氧化酶 H2O2 以H（e）为受体的指示酶 以NAD(P)H为辅酶参与的指示酶 触酶 POD (最常用） P152 2H2O2+4-AAP+酚 醌亚胺(红色)+4H2O POD 例：葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖 Glu＋O2＋H2O GA＋H2O2 H2O2＋4-AAP＋酚 H2O＋O2＋红色醌类化合物 GOD POD 葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）利用O2和H2O将Glu氧化成GA，并释放H2O2 ，过氧化物酶（peroxidase，POD）在色原性氧受体存在时将H2O2分解为H2O和O2 ，并将色原性氧受体4-AAP和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的量与Glu含量成正比。 即POD催化下， H2O2氧化芳香族胺色素原生成有色色素，此类色素原供氢体包括：OT、DAB、ODA、TMB。 2. NAD(P)+或NAD(P)H偶联的脱氢酶及其指示反应 许多氧化还原反应，尤其是作为工具酶如LD、GLD、G6PD等参与时，常将底物的H去除后传递给NAD (P)+形成NAD(P)H。借助NAD(P)H340nm处特征性的光吸收，借此用分光光度法检测。 如：葡萄糖、尿素、β-羟丁酸、甘油三酯、甲醇、血氨、 ALT、AST、LD、GLD、CK、ALD、G6PD、ICD等。 例： 尿素＋H2O 2NH3＋CO2 NH3＋ α-酮戊二酸 ＋NADH＋H+ 谷氨酸＋NAD+＋H2O 尿素酶 GLD P152 P+NAD(P)H+H+ PH2+NAD(P) + 五、血清酶活性浓度测定条件的优化 方法 仪器设备 试剂 自动生物化学分析仪参数设置 标本的采集、运输与保存 P153 标本的采集、运输与保存 溶血：细胞内酶而言，细胞内外浓度差异大；所以应及时进行分离，静脉采血后应在1～2h内分离血清。 抗凝剂：利用草酸盐、枸橼酸盐、EDTA抗凝的血浆一般不用作酶活性测定；肝素对ALT、AST、CK、LD、ACP检测均无影响，可用于急诊；临床多用血清为首选测定标本。 温度：大部分酶在低温中比较稳定，一般在血清分离当天测定，否则应放冰箱冷藏；通常在0～4 °C下使用、处理及保存，除了一些冷变性的酶；液氮可作为酶学测定时血清标本及质控长期保存的方法。 P155 六、酶活性浓度单位 （一）酶活性单位 惯用单位 用首先报告该种酶测定方法的临床酶学家的名字来命名其单位，即使同一种酶因方法不同而有数种活性单位，参考值差别很大。 国际单位 1963年，1IU＝1μmol/min （25 °C 及其他最适条件下） 1976年， 1U＝1μmol/min（特定条件下） 1979年，1Katal＝1mol/s（规定条件下），1U＝16.67nKatal P156 （二）酶活性浓度单位 以每单位体积所含的酶活性单位数表示； 各国学者习惯用U/L表示体液中酶催化活性浓度， 1U/L=16.67nKatal/L 正常上限（upper limits of normal，ULN）倍数 把酶测定值转换为正常上限值的倍数； 易于比较解释来自不同方法的结果，利于各实验室间质评调查； 可将ULN进一步适当分级，制定出轻度、中度及重度增加的范围，使检测结果更加一目了然； P156 （三）酶活性浓度计算