IC50曲线测试实验流程.docVIP

IC50 曲线的测定 IC50即半抑制率， 标准曲线是一个S型曲线。IC50为50%抑制浓度即细胞存活量为对照样本一半时所对应的浓度，半数抑制越低，说明药物对细胞的毒性越高。 实验操作步骤如下： 细胞准备： 细胞状态检测：从培养箱中取出细胞，显微镜下观察。 状态描述： 观察结果，细胞汇合度： 细胞处理： 将细胞培养基吸出后，加入2ml PBS缓冲液洗一次，加入1ml 0.25% Trypsin-EDTA，放入培养箱中静置数分钟，直至细胞完全离壁悬浮，加入5ml 含10%FBS的培养基(无抗生素)终止酶活，混匀后液体转移至15ml离心管，1000rpm 离心3min，弃去液体。 细胞计数： 于15ml离心管中加入1ml 含10%FBS的培养基 (无抗生素)，充分混匀。取40ul计数，公式如下： 细胞浓度（数/ml）=（4大方格细胞数之和/4）×104×稀释倍数 最终得到的细胞密度填入下表，根据最终需要细胞浓度及体积进行稀释。 细胞 数/孔 起始浓度 (/ml) 所需体积 (ml) 需20%FBS DMEM (ml) 总体积 终浓度 (/ml) 细胞株名 稀释细胞 将稀释好的细胞用排枪加至96 / 384孔板： 置于培养箱37℃ 5%CO2条件下培养24小时，待细胞贴壁后加药。 药物稀释： 将药物进行3倍倍比稀释。 将稀释好的药物加入前一天铺好细胞的细胞板上，37℃ 5%CO2培养箱培养72h。 荧光素酶检测： 将Celltiter-Glo与ddH20 以1:1混合，加入细胞板（96板：20ul/well; 384板：10ul/well），静置10min后，TECAN infinite F200酶标仪读值。 分析数据，绘制IC50曲线，寻找IC30,IC50等值。 验证IC50: 根据IC50曲线找出IC50理论值，分别取1/2 倍、1倍及2倍的理论值进行药物浓度验证。 附录： Materials for Experiment Name Corporation 96-well plate Corning 384-well plate Greiner CentrifugeTube (15ml) BD Falcon Pipets(10ml) Greiner T-25 Flask Corning Tips,EP Tube Axygen, Matrix Reagents for Experiment Name Corporation FBS Excell DPBS Hyclone 0.25%Trypsin-EDTA GIBCO Medium Hyclone Cell-Titer Glo? Promega Instruments for Experiment Name Model Corporation Inverted Microscope TS100 Nikon CO2 Incubator BB16UV Heraeus Bechtop ZHJH-1109 ZHCHENG Centrifuge 5200 KUBOTA Microplate Reader infinite F200 TECAN Dispenser μFill Bio-Tek