多糖各种提取方法课件.docVIP

一、植物多糖的提取 1 溶剂提取法 1．1 水提法 水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。用水作溶剂 来提取多糖时， 可以用热水浸煮提取， 也可以用冷水浸提。 一般植物多糖提取采 用热水浸提法， 该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物； 或者利用多糖不 溶于高浓度乙醇的性质， 沉淀提纯多糖； 但由于不同性质或不同相对分子质量的 多糖沉淀所需乙醇浓度不同， 它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离； 还 可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分 离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。但以根茎为主的植物体 ,细胞壁多糖含量高 ,热 水直接提取率不高。此时为破坏细胞壁 ,增加多糖的溶出，有两种处理方法 :一为 酶解,二为弱碱溶解。 1．2 酸碱提法 有些多糖适合用稀酸提取， 并且能得到更高的提取率。 但酸提法只在一些特定的 植物多糖提取中占有优势， 目前报道的并不多。 而且即使有优势， 在操作上还应 严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。 有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。 采用的稀碱多位为 0．1mol／L 氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以 氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。 同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。 与 酸提类似， 碱提中碱的浓度也应得到有效控制， 因为有些多糖在碱性较强时会水 解。另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉 淀。 1．4 生物酶提取法 酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术， 在多糖的提取过程 中，使用酶可降低提取条件， 在比较温和的条件中分解植物组织， 加速多糖的释 放或提取。此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用 的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。 1．5 超声提取法 超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的 “空化作用 ”对细 胞膜的破坏， 有利用植物有效成分的释放， 而且超声波能形成强大的冲击波或高 速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质 的扩散。另外，超声波的热效应使水温基本在 57℃，对原料有水浴作用。超声 波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。超声提 取的影响因素有： 超声时间、 超声频率（一般低频中提取效率高， 但也有例外） 、 料液比和温度等。 1．6 微波提取 微波是频率介于 300MHz 和 300GHz 之间的非电离电磁波，微波提取的原理是 微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能 细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂， 位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。 微波技术应用于植物细胞破壁，有效地提高了收率。具有穿透力强、选择性高、 加热效率高等特点。 影响微波浸提的主要因素为浸提时间、 样品和提取溶剂的含 水量，溶剂的介电常数和电导率 （介电常数和电导率的溶剂对微波的吸收较好） 、 微波功率等。 但是由于微波泄漏对操作者影响很大， 因而对设备的要求较高， 这 对微波的研究及应用带来了一定的困难。 二、植物多糖的分离纯化 在多糖提取物中，常会有无机盐、蛋白质、色素及小分子物质等杂质，必须分别 除去．一般是先脱除非多糖组分，再对多糖组分进行分级． 2．1 除蛋白 除蛋白质时一般选择能使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的试剂来处理， 如酚、三氯 乙酸、鞣酸等。但必须处理时间短， 温度低， 避免多糖降解。 Sevage 法（氯仿： 戊醇/丁醇=4：1）和三氟三氯乙烷法在避免降解上有较好效果但要达到除尽游离 蛋白质的目的仍需反复处理。 如能加入蛋白质水解酶， 使蛋白质大分子进行一定 程度的降解，再用 Sevage 法处理，一般效果更好。 为了避免使用有机溶剂也可采用反复冻融的方法除蛋白，将多糖液浓缩后，一 20℃室温反复冻融 7～8 次，离心除去蛋白质。另外，蛋白质在等电点时溶解度 最小，用氢氧化钙饱和液调 pH10～pH11 可除去偏碱性的蛋白质，然后再用硫 酸调 pH5～pH6，可除去偏酸性的蛋白质。 冻融和等电点沉淀除蛋白质操作简单， 但多糖液里往往有低浓度的蛋白质残留，应与其它方法结合使用。 2．2 脱色 植物多糖提取物中含有酚类化合物而使其颜色较深，可用吸附剂 (纤维素、硅藻 土、活性炭等 )、离子交换柱 (DEAE 一纤维素)、氧化剂 (H2O2) 等脱除。活性炭 比表面积大， 吸附能力强， 在进行当归多糖的提取时只向多糖液中加入了 0．1％ 左右的活性炭，煮沸后滤过即完成了脱色操作。 此法成本低廉，适合工业化生产。 2．3 除小分子杂质 小分子杂质如低聚