血脂四项测定.ppt

* * 血脂四项的测定 临床生物化学与分子生物学教研室 临床生物化学及检验 * * 血浆中所含脂类统称为血脂，血脂含量可以反映体内脂类代谢的情况。检测血脂时，常在饭后12-14小时采血。 我国血脂异常防治建议和美国国家胆固醇教育计划成人治疗计划Ⅲ （NCEP-ATP Ⅲ）都要求临床常规血脂测定中应至少测定TC、TG、HDL-C及LDL-C这四项。有条件的实验室可测定apoAI、apoB及Lp(a)。　 * * 【目的要求】 掌握：TC、HDL-C、LDL-C、TG测定的基本原理。 熟悉：TC、HDL-C、LDL-C、TG测定的操作过程。 了解：TC、HDL-C、LDL-C、TG测定对动脉粥样硬化、原发性高脂血症等疾病诊断的临床意义。 * * 实验原理---总胆固醇测定（胆固醇氧化酶-过氧化物酶法） 胆固醇酯+H2O 胆固醇+脂肪酸 胆固醇+1/202 +H2O △4-胆甾烯-3-酮+H202 2H202+4-氨基安替比林+酚 醌亚胺+4H2O 胆固醇酯酶 胆固醇氧化酶 过氧化物酶 样品中游离及脂化的胆固醇，经过上述反应产生醌亚胺，在505nm波长处测定其吸光度值，计算其含量。 * * 实验原理---HDL-C测定 加入低密度脂蛋白胆固醇的抑制剂，将低密度和极低密 度部分隐蔽起来，直接测定高密度部分的胆固醇含量， 显色反应原理同总胆固醇，在510nm波长处测定吸光度值，计算 其含量。 LDL-C能与磷钨酸-镁和聚乙二醇复合剂作用产生沉淀，用分散剂可使沉淀颗粒细小均一，在630nm处测定其吸光度值，计算其含量。 实验原理---LDL-C测定 * * 实验原理---TG测定（甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶法） 2H202+EHSPT+4-AAP 脂蛋白脂酶 甘油激酶 过氧化物酶 甘油三酯+H2O 甘油+脂肪酸 甘油+ATP 3-磷酸甘油+ADP 3-磷酸甘油+O2 3-磷酸甘油氧化酶 磷酸二羟丙酮+H202 醌亚胺+4H2O * * 主要试剂 总胆固醇测定试剂 试剂1：Na2HPO4﹒12H2O、KH2PO4、 苯酚、 胆酸钠，NaN3； 试剂2：MOPSO、NaOH、 NaN3、 MgCL2﹒6H2O、 4-氨基安替比林、EDTA-Na2、BSA、CE、CO、POD、 液体活性剂Ⅰ。 TG测定试剂 试剂1： PIPES、CAPOS、BSA、MgCl2、甘油激酶、3-磷酸甘油氧化酶、过氧化物酶、显色剂Ⅰ、显色剂Ⅱ、NaN3； 试剂2： PIPES、 CAPOS、BSA、GYK、4-APP、显色剂Ⅱ、NaN3。 * * 主要试剂、器材 HDL-C测定试剂 试剂1： 磷酸盐缓冲剂、LDL-C抑制剂、DHBS ； 试剂2：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-APP。 LDL-C测定试剂 试剂： 磷钨酸、氢氧化钠。 器材： 分光光度计、半自动生化分析仪、恒温水浴箱、微量进样器、移液管等。 待测标本：血清 * * 1、将试剂1与试剂2按1:1比例混匀为工作液。 2、按表格加样。 加入物（ml） 空白管(B) 标准管(S) 测定管(U) 血清 - - 0.02 标准液 - 0.02 - 蒸馏水 0.02 - - 工作液 2.0 2.0 2.0 3、比色?：混匀各管，置37℃水浴10 min，用分光光度计比色，波长505nm，光径1.0cm，以空白管调零，记录各管的吸光度值。 总胆固醇测定步骤 * * 1、将试剂1与试剂2按10:1比例混匀为工作液。 2、按表格加样。 加入物（ml） 空白管(B) 标准管(S) 测定管(U) 血清 - - 0.02 标准液 - 0.02 - 蒸馏水 0.02 - - 工作液 2.0 2.0 2.0 3、比色?：混匀各管，置37℃水浴10 min，用分光光度计比色，波长510nm，光径1.0cm，以空白管调零，记录各管的吸光度值。 HDL-C测定步骤 * * 1、按表格加样。 加入物 空白管(B) 标准管(S) 测定管(U) 血清（ul） - - 50 标准液（ul） - 50 - 蒸馏水（ul） 50 - - 工作液（ml） 3.0 3.0 3.0 2、比色?：混匀各管，室温放置3 min，用分光光度计比色，波长630nm，光径1.0cm，以空白管调零，记录各管的吸光度值。 LDL-C测定步骤 * TG测定步骤 * 加入物（ml） 空白管(B) 标准管(S) 测定管(U) 试剂R1 0.8 0.8 0.8 血清 - - 0.01 标准液 - 0.01 - 蒸馏水 0.01 - - 充分混匀，37℃水浴5min 试剂R2 0.2 0.2 0