植物组织培养第三章-植物器官和组织培养.ppt

第三章 植物器官和组织培养 植物器官和组织培养的基本程序 植物营养器官培养 植物繁殖器官培养 植物组织培养 第一节 植物器官和组织培养的基本程序 无菌外植体的获得 初代培养物的建立 形态发生和植株再生 培养产物的观察记载 无菌外植体的获得 （一）茎尖、茎段、叶片的灭菌 清水冲洗，吸干—0.1-0.2%氯化汞浸泡2-10min，（70%酒精浸泡数秒，10%次氯酸钙浸泡10-20min或2%次氯酸钠浸泡15-30min）—灭菌水冲洗3-5次—无菌滤纸吸干—分割—接种。 （二）根、块茎、鳞茎的灭菌 生长在土中，灭菌困难，以受损伤。 灭菌前仔细清洗，加大灭菌剂浓度或延长灭菌时间。 无菌外植体的获得 （三）花蕾的灭菌 未开放的花蕾中的花药为花被包裹，处于无菌状态，采摘后可直接灭菌。 70%酒精浸泡10-30s—0.1-0.2%氯化汞浸泡3-10min，（或1%次氯酸钠浸泡10-20min）—灭菌水冲洗3-5次—无菌滤纸吸干—分割—接种。 （四）果实和种子的灭菌 表皮有茸毛或蜡质，需在灭菌剂中加入几滴土温-80。 果实70%酒精浸泡数秒—0.1-0.2%氯化汞浸泡3-10min，（或1%次氯酸钠浸泡10-20min）—灭菌水冲洗3-5次—无菌滤纸吸干—分割—接种。 初代培养物的建立 （一）无菌环境 培养基、接种器械、超净工作台、接种室环境、抗生素物质（去除侵入组织内部的病菌。见表） （二）规范操作 操作技术熟练、工作经验、操作者、进入超净工作台的物品表面。 （三）条件合适 培养基种类、激素种类和浓度、其他添加物、外植体来源、生长发育状态、培养条件。 形态发生和植株再生 建立的无菌培养物在适宜的离体环境中，生长发育（形态发生）形成完整的小植株。 离体材料的形态发生的途径： 器官发生 体细胞胚胎发生 形态发生和植株再生 器官发生：芽或芽原基起源于培养组织中比较表层的细胞，即外起源。根原基发生在组织较深处，即内起源。两者之间一般没有什么联系，呈现单向极性。 胚状体发生：极大多数体细胞胚起源于单细胞，形成的胚状体具有双极性，在其发育的早期阶段，在方向相反的两端分化出茎端和根端，其维管组织与母体植物或外植体的维管组织通常没有联系。胚状体维管组织呈独立的Y形。 培养产物的观察与记载 （一）愈伤组织 诱导率=产生愈伤组织的外植体数/外植体总数×100% 生长量=培养一段时间后愈伤组织干重或鲜重-接种时愈伤组织的干重或鲜重 （二）胚状体 胚状体诱导率=产生胚状体的外植体数/外植体总数×100% （三）芽 芽分化数=产生芽的外植体数/外植体总数×100% （四）根 发根率=发根芽数/培养芽数 每个材料平均发根数 第二节 植物营养器官培养 植物根段培养 植物茎段培养 植物叶培养 一、离体根的培养 植物根段培养是指以植物的根切段为外植体进行培养的技术。 （一）根无性系的建立 来自无菌种子发芽产生的幼根切段或植物根系经灭菌处理后的切段，可以以两种方式进行培养，建立根的无性繁殖系。 一、离体根的培养 1、根的直接增殖 1）根无性繁殖系的建立 将种子进行表面消毒，在无菌条件下进行无菌萌发，待根伸长后从根尖一段切取长1.0cm的根尖，接种培养基中。 这些根的培养生长很快，番茄根每天约生长10mm，几天后发育出侧根。待侧根生长约一周后，即可切取侧根的根尖进行扩大培养，它们又迅速生长出侧根，又可切下进行培养，如此反复，就可得到从单个根尖衍生而来的离体根的无性系。 2）培养条件：黑暗培养，温度为25—27℃ 一、离体根的培养 3）培养基 离体根培养所用的培养基很多，多为无机离子浓度低的White培养基，其他培养基如MS、B5培养基等也可采用，但必须将其离子浓度稀释到2/3或1/2。 一、离体根的培养 4）培养方式 离体根的培养方式有三种类型。 第一种固体培养法，即将根尖接种在固体培养基上，根依靠培养基中的养分和生长物质而不断生长。 第二种是液体培养法，把根尖接种在无琼脂的液体培养基中，经常振荡使根获得充足的氧气。 第三种是固体-液体培养法，就是把根基部插入固体琼脂培养基中，根尖浸在液体培养基中，根尖生长而根不断的伸长和分枝。 一、离体根的培养 2、根的间接增殖 第一步在脱分化培养基上诱导形成愈伤组织，如胡杨的根段培养，可诱导形成白色愈伤组织。 第二步在再分化培养基上诱导形成芽的分化，如胡杨从绿色愈伤组织分化出小植株。 一、离体根的培养 （二） 离体根生长的营养要求 1、无机成分 要求培养基中有全部必要元素，因为它是离体生长所需要的，一般的为MS、B5培养基。 2、氮源 氮源有铵态