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第一章　蛋白质化学 胡 等电点的计算 氨基酸的化学反应 由α-氨基参与的反应 5.二硝基氟苯：黄色，肽链末端分析 氨基酸的化学反应 由α-氨基参与的反应 6.与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应 二、蛋白质结构中的化学键 1.肽键 peptide bond（化学键） 2.二硫键 disuffide bond（化学键） 不同肽链，同一肽链不同部位 半胱氨酸 稳定共价键、稳定肽链空间结构 破坏，蛋白质活性丧失。 角蛋白 二、蛋白质结构中的化学键 3.酯键 ester bond（化学键） 丝氨酸、苏氨酸羟基与氨基酸的羧基 磷蛋白：丝氨酸、苏氨酸羟基 维系蛋白质结构，行使功能 4.离子键 ionic bond（库伦作用） 相反电荷的基团 碱性氨基酸，生理条件下 高浓度盐、过高过低PH 羧基PK低，氨基PK高，1-2个PH单位 二、蛋白质结构中的化学键 5.配位键 dative bond（共价键） 金属离子：Fe,Cu,Mn,Zn 高级结构：锌指结构 螯合剂，蛋白质解离成亚基，变形失活 6.氢键 hydrogen bond 氢原子与两个电负性强的原子（F,O,N） 弱键，供体原子、氢、受体原子处在一条直线 氢供体：=NH,-OH,-NH2,-NH3+,-CONH2 氢受体：-COO-,C=O 二、蛋白质结构中的化学键 7.范德华作用力 原子、基团、分子之间弱相互作用 非专一性的吸引力 取向力、诱导力，色散力 与距离6次方成反比，吸引不相碰 蛋白质内部非极性结构，维系蛋白质高级结构 8.疏水作用hydrophobic bond 非极性侧链（疏水基团）在极性溶剂中为了避开水相互彼此靠近所产生的作用力 本质范德华作用力 蛋白质的内部结构中 2. 第四节 蛋白质结构与功能的关系 蛋白质一级结构是空间结构和生物功能的基础，一级结构决定空间结构；但一级结构并非决定空间结构的唯一因素。空间结构是生物活性的直接体现。 1、一级结构中的保守序列决定空间结构 （1）同一蛋白质不同状态的比较：一级结构决定空间结构 【经典举例】蛋白变性与复性 一、一级结构与功能的关系 1、一级结构中的保守序列决定空间结构 （2）不同蛋白质之间的比较：相似结构相似功能、不同结构不同功能 一、一级结构与功能的关系 1、一级结构中的保守序列决定空间结构 （3）保守序列、保守氨基酸改变，功能改变；保守氨基酸不变，功能不变 【经典举例】分子病 一、一级结构与功能的关系 1、空间结构体现生物特异性 2、空间结构体现生物活性 3、空间结构的灵活性，体现了生物活性的可调节特性 二、空间结构与功能的关系 空间结构中的特定区域体现生物活性 肌红蛋白与血红蛋白 别构效应（别位效应、变位效应，allosteric effect）：蛋白质分子的特定部位（调节部位）与小分子化合物（效应物）结合后，引起空间构象发生改变，从而促使生物学活性变化的现象称为变构效应。包括正协同、负协同效应 【经典举例】血红蛋白（Hb）：由α2β2四聚体组成，每个亚基含有1个血红素辅基；Hb的氧解离曲线呈“S”型。 多种空间构象，多种活性状态 第五节 蛋白质的理化性质及分离纯化 1、两性解离与等电点：同“氨基酸两性解离” 2、紫外吸收：最大吸收波长＝280nm 3、胶体性质：不能透过半透膜 4、沉淀、凝固 5、蛋白质变性 蛋白质在溶液中维持稳定的因素： 表面电荷、水化层（溶剂化层） 变性蛋白不一定沉淀，沉淀蛋白也不一定变性 蛋白质的理化性质 （1）变性：在某些理化因素作用下，蛋白质的空间结构被破坏，从而导致其理化性质改变、生物活性丧失的现象称为变性。变性不涉及一级结构的变化。 理化性质的变化：紫外吸收、化学活性及粘度上升，易被蛋白酶水解；溶解度下降、结晶能力丧失。 5、变性(denaturation)、复性(renaturation) 三、氨基酸的理化性质 1、物理性质 2、两性解离 等电点（isoelectric point, pI）：在某一pH环境中，氨基酸解离成阳性离子及阴性离子的趋势相等，所带净电荷为零，在电场中不泳动。此时，氨基酸所处环境的pH值称为该种氨基酸的等电点(pI)。 (zwitterion) 等电点计算 ①侧链为非极性基团或虽为极性基团但不解离的氨基酸：pI=?(pK1+pK2) ②酸性氨基酸(Glu、Asp)及Cys：pI=?(pK1+pKR) ③碱性氨基酸(赖、精、组)：pI=?(pK2+pKR) 带电状态判定 pI-pH0 …………….带负电 pI-pH0 …………….带正电 pI-pH＝0 …………….不带电 3、紫外吸收： Trp、Tyr和Phe在280nm波长附近具有最大吸收峰，其中Trp的最大吸收最接近280