siRNA-PGC-1α基因对MPP%2b诱导SH-SY5Y细胞损伤的影响.pdfVIP

英文缩略词表(Abbreviations and acronyms) 缩写 英文全称 中文全称 DA Dopamine 多巴胺 GFP green fluorescent protein 绿色荧光蛋白 MOI multiple of infection 感染倍数 MPP+ 1-methyl-4- phenyl-pyridine ion 甲基苯基四氢吡啶离子 mRNA Message ribomicleic acid 信使核糖核酸 PBS Phosphate-burrered saline 磷酸盐缓冲液 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 PD Parkinson Disease 帕金森病 PGC-1α peroxisome proliferator-activated receptor 1 过氧化物酶体增殖物激活受体γ alpha 辅激活因子1 α PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 RNAi RNA interference RNA干扰 siRNA Small interfering RNA 小干扰RNA TH tyrosine hydroxylase 酪氨酸羟化酶 1 + siRNA-PGC-1 α基因对MPP 诱导SH-SY5Y 细胞损伤的影响 中文摘要 【背景】 帕金森病(Parkinson disease，PD)是一种中老年人常见的中枢神经系统退行性 疾病,线粒体功能障碍在PD发病过程中发挥着重要作用，在与PD发病相关的众多 环境与遗传因素中，线粒体功能障碍是一个共同的作用点。过氧化物酶体增殖物 激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor 1 alpha，PGC-1α) 是一个多功能转录调节因子，广泛参与线粒体生物合成、糖脂代谢以及抗氧化通 路的调节。近年来普遍认为PGC-1α有可能成为早期干预PD 的重要治疗靶点，但在 PD 的发病机制中PGC-1α信号传导对线粒体生物活性的影响尚不明确。目前虽然已 对PGC-1α有了大量研究，但目前尚未发现它的特异性抑制剂。RNAi技术，即RNA 干扰，能利用特定序列的小双链RNA高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使 mRNA 降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，广泛用于基因分子生物学研 究。 【目的】 1、通过腺病毒介导siRNA对SH-SY5Y细胞PGC-1α基因沉默，并筛选出最有效的干 扰序列。 + 2 、探讨siRNA-PGC-1α对MPP 诱导SH-SY5Y细胞模型的生长及线粒体功能、能量 的影响。 【方法】 1、通过免疫组化鉴定SH-SY5Y 细胞酪氨酸羟化酶（TH ）的表达情况。 2 、用携带绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-GFP)转染SH-SY5Y 细胞，培养24h 后在荧 光显微镜下观察荧光细胞的数目判断转染率，确定合适的感染倍数 （MOI ）。 3、用腺病毒分别介导四种针对PGC-1α 基因的干扰序列PGC-1、PGC-2 、PGC-3、 PGC-4 和一个阴性对照序列 Ad ，感染 SH-SY5Y 细