DNA重组技术的基本工具(讲课)课件.ppt

普通棉花　　 抗虫棉 精品 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫基因) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 转基因棉花植株 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 精品 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与棉花DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 运载体 精品 1、简称： 2、分布： ?? 一、限制性核酸内切酶 ——“分子手术刀” 主要在原核生物中 限制酶 寻根问底(P4) 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是是什么吗？ 精品 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 限制酶在原核生物中的作用 精品 思考与探究 P7 2、为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 通过长期的进化，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 精品 以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列 如：GAA TTC CCC GGG CTT AAG GGG CCC 限制酶所识别的序列有什么特点 精品 EcoRⅠ （在G与A之间切割） SmaⅠ （在G与C之间切割） Hind Ⅲ （在A与A之间切割） G A A T T C C T T A A G C C C G G G G G G C C C A A G C T T T T C G A A 中轴线 （专一性） 限制酶的识别特点 精品 ?? 3、特点: 识别特定核苷酸列, 切割特定切点 （专一性） 4.切点： 磷酸二酯键 精品 精品 精品 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 Go back 精品 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 精品 SmaⅠ 平末端　　　平末端 精品 4、结果： 产生黏性未端和平末端 精品 以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称重复排列 如：GAA TTC CCC GGG CTT AAG GGG CCC 限制酶所识别的序列有什么特点 精品 ?? 3、特点: ?? 4、结果： 1、简称： 2、分布： 一、限制性核酸内切酶 主要在原核生物中 限制酶 识别特定核苷酸列, 切割特定切点 （专一性） 产生黏性未端或平末端 笔记 精品 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? 精品 Go back ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合 将不同种来源的DNA片段连接起来 生物A基因片段 生物B基因片段 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 酶切 精品 1、作用: 把DNA片段拼接成新的DNA， 2、作用原理： 催化磷酸二酯键形成,（不是氢键） 二、 DNA连接酶 ——“分子缝合针” 精品 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键