分离工程双水相萃取法(精).pptVIP

第十一章 ??双水相萃取法 双水相萃取特点 (1) 保留生物分子活性 (2) 除细胞碎片(与离心和膜分离比成本低) (3) 表面张力低，耗 能少 (4) 成本高 (5) 大分子及小分子萃取 萃取法的应用 在生物转化、蛋白质、核酸、病毒、甲酸脱氢酶、红霉素、头孢霉素C等方面应用 价格较贵(原料成本占85％),未广泛工业化 不同方法除去细胞碎片的比较（100公斤细胞） 11.1 双水相体系 11.1.1 双水相的形成 葡聚糖(2.2%)溶液 甲基纤维素(0.72%)溶液 混合静止后产生两相， 上相 甲基纤维素 90.3％ 下相 葡聚糖 71.8％ 双水相形成原因： 分子之间作用力 聚乙二醇（PEG）/ 葡聚糖 (Dextran） (1) A-A A-B 相分离 (2) A-AA-B 混合 (3) A-BA-A 凝聚复合 成相是由于高聚物之间的不溶性，无法相互渗透，不能形成均一相，具有相分离倾向，在一定条件下即可分为两相。 11.1.2 双水相体系类型 (1) 高聚物-高聚物 (PEG-Dextran) 易于与后续处理 近年来出现聚合物—无机盐 形成两相 (2) 高聚物-盐 (PEG-(NH4)2SO4 ) 盐浓度高，蛋白质易盐析， 废水处理困难 各种双水相系统 混溶性疏水梯度 11.1.2 双水相体系相图 双节线 系线 节点 T、B 临界点 K 杠杆规则 11.2 双水相萃取过程的理论基础 11.2.1 表面自由能的影响 蛋白质等生物大分子物质在两相中的分配也服从Nernst分配定律 K＝ct/cb 式中:ct,cb上、下相中溶质浓度 相系统固定时,分配系数K为常数,与溶质浓度无关。溶质的分配，总是选择两相中相互作用最充分或系统能量最低的相，根据平衡时化学位相等原则， K 由Brownstedt方程式求得 11.2.2 表面电荷的影响 如粒子带有电荷，两相中分配不相等时，就会在相间产生电位。称为道南电位 (Donnan Potential)。可用下式表示： 一种盐正、负离子对两相有不同亲和力，即Kz+A≠Kz-B时,就会产生电位差; (Z++Z-)↑电位差↓对分配系数产生影响 影响分配系数的因素,用Gerson公式表示： -lgK＝? ??＋? ?? ? 式中：?—表面积； ?? —两相表面自由能之差；δ—电荷数； ?? —电位差；? —由标准化学位和活度系数组成的常数。 K和表面自由能与电位差成指数关系。影响K因素很多,各因素间影响 目前无定量关联K与蛋白质分子性质关系。最佳操作条件，实验得到 11.3 影响物质分配平衡的因素 聚合物及成相盐种类及浓度 聚合物平均分子量 菌体或细胞种类及含量 其他盐种类及浓度 体系pH值、温度。 目的：选择最适条件,提高分配系数选择性 产物分离和纯化,直接从细胞破碎萃取蛋白质无需碎片分离。改变pH和电解质浓度反萃取。 11.3.1 聚合物及其分子量的影响 重要性：聚合物类型决定了是否能萃取 聚合物溶液混合时的情况： ①完全混溶性(匀相溶液)； ②相分离； ③复杂凝聚(聚合物在同一相,水另一相 离子和非离子聚合物都可构成，当同为离子电荷相反时，互相吸引发生复杂的凝聚。 11.3.1 聚合物及其分子量的影响 不同聚合物 蛋白质存在疏水区 当pH=pI Ko与系统的疏水性有关 不同聚合物水溶液中疏水性： 葡萄糖硫酸盐 甲基葡萄糖 葡萄糖 羟丙基葡聚糖 甲基纤维素 聚乙烯醇 聚乙二醇 聚丙三醇 这种疏水性的差别对目的产物与相的相互作用是重要的。 同一聚合物分子量不同 同一聚合物的疏水性随分子量增加而增加，其大小的选择依赖于萃取过程的目的方向 在上相(PEG聚合物)获得较高的蛋白质收率，应降低→平均分子量 在下相获得较高的蛋白质收率则平均分子量→增加 PEG平均分子量对分配平衡的影响 PEG分子对不同分子量蛋白质分配系数的影响 11.3.2 系线长度对分配平衡的影