瘢痕疙瘩中SFRP2与Periostin间相互作用与意义-第三军医大学学报.doc

利用免疫共沉淀-蛋白测序技术验证Periostin和SFRP2之间的相互作用基金项目：国家重点基础研究发展规划专项经费资助项目 基金项目：国家重点基础研究发展规划专项经费资助项目（G1999054204） 作者单位：第三军医大学附属西南医院整形外科，重庆，400038 通信作者：李世荣 吴军 陶熹 王珍祥 袁顺忠 李世荣 吴军 【摘要】目的 验证凋亡相关蛋白基因SFRP2(secreted frizzled-related protein 2)和骨母细胞特异性因子-2 Periostin（osteoblast-specific factor 2）间的相互作用。方法 分别构建重组载体pCMV-Myc-SFRP2和pCMV-HA-Periostin经双酶切鉴定正确，共转染人293细胞，抗Myc单克隆抗体沉淀Myc-SFRP2相互作用蛋白复合物后，进行SDS、考马斯亮蓝染色，切下目的条带，利用HPLC-Chip /MS纳流液质联用技术进行肽序列分析，经Spectrum Mill搜索Swissport数据库后鉴定蛋白质。结果 经HPLC-Chip /MS纳流液质联用技术分析，免疫沉淀复合物内可检测出Periostin的表达。结论 Periostin与SFRP2间存在相互作用，在瘢痕疙瘩中可能具有重要作用。 关键词：免疫共沉淀；相互作用；SFRP2；Periostin；瘢痕疙瘩 Confirmation the interaction between Periostin and SFRP2 by combination of co-immunoprecipitation and protein sequencing TAO Xi, WANG Zhen-xiang, LI Shirong, WU Jun (Department of Plastic Surgery and Institute of Burn, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China) 【Abstract】 Object To confirm the interaction between Periostin（osteoblast-specific factor 2）and SFRP2(secreted frizzled-related protein 2) by co-immunoprecipitation and HPLC-Chip /MS techniques. Methods HA-tagged fusion protein (HA- Periostin) expression vector was constructed, identified and transfected into human embryo kidney 293 (HEK293) cells alone oe with Myc-tagged fusion protein (Myc-SFRP2) expression vector pMCV-Myc-SFRP2. The interaction between SFRP2 and Periostin was detected by combination of co-immunoprecipitation and HPLC-Chip /MS techniques. Result From the Myc-SFRP2 immunoprecipitation complex, Periostin was identified by protein sequencing. Conclusion There is an interaction between SFRP2 and Periostin. Key words: co-immunoprecipitation; protein-protein interaction; Periostin; SFRP2; HPLC-Chip /MS 我们以前曾对同体瘢痕疙瘩和正常皮肤内差异表达的基因进行了基因芯片筛选，确定了显著高表达基因SFRP2（Ratio=7.9352） [1]。进一步对从瘢痕疙瘩分离的成纤维细胞在体外培养经氢化可的松处理前后，表达变化同样存在着明显差异[2]；原代培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFs）和正常成纤维细胞（NFs）利用QRT-PCR技术从基因水平上证实SFRP2基因在前者中的表达要显著高于后者。随后，我们利用酵母双杂交技术对SFRP2的相互作用蛋白进行初步筛选，获得了一个能与SFRP2发生相互作用的蛋白Periostin。本实验在分别构建SFRP2的融