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微生物遺傳學實驗 * 東吳大學微生物學系 曾惠中 教授 遺傳工程 分子生物學 生物技術 生命科學 微生物遺傳學 微生物學 生物化學 實驗 以 驗實 實際体驗 以 驗證真實 教學基本設計 製備遺傳實驗材料 遺傳分析 獵取基因 基因構造與功能 遺傳實驗材料 質体：plasmid, phagemid 噬菌体：lambda, M13 細菌菌体：E. coli, Bacillus Transformation Conjugation Transduction Transposition Complementation Suppression By Gene Transfer Recombination Genotype vs. Phenotype Gene Structure Gene Expression Gene Regulation 遺傳分析 介紹與準備 2. 噬菌體及噬菌體DNA的製備 (Phage and phage DNA preparation) 3. 質體DNA的製備﹕快速篩選法及小量抽取法 (Plasmid preparation---quick screening and small scale method) 4. 酵素反應(Enzymatic reaction) 5. 轉型(Transformation) 6. 突變(Mutagenesis) 7. 轉導(Transduction) 8. 互補(Complementation) 9. 接合與轉座(Conjugative transposition) 10. 分子複殖(Molecular cloning) 11. 聚合酵素連鎖反應(Polymerase chain reaction) 12. 南方雜配反應(Southern hybridization) 實驗項目 Plasmid extraction and purification Chromosomal DNA preparation Total RNA preparation Agarose gel electrophoresis Phage preparation by induction of lysogen Conditional mutation and Nonsense suppression Plaque forming assay Density gradient equilibrium ultracentrification Competent cell preparation Plasmid transformation In vitro mutagenesis Alpha complementation ( blue white screening ) Restriction and ligation Basic cloning technique PCR Southern blotting and hybridization 實驗技術 儀器設備 天平 1 酸鹼儀 1 水浴槽 2 培養箱 3 微量離心機 6 微量吸管 22 電泳槽 11 攪拌器 4 計時器 20 紫外燈與攝影儀 1 光電比色儀 1 PCR 儀 1 超高速離心機 1 訓練方式 小班教學：藥品充足、器材齊備 親自動手：獨立操作、整合負責 循序漸進：微生物學，生物化學，遺傳學 *