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柱层析法的原理和方法 一、原理 柱层析是化合物在液相和固相之间的分配，属于固-液吸附层析。 利用固定相对液体相中的各组分吸附能力不同，从而以不同速度向下迁移，形成若干色带，分别收集。 二、操作 1.装柱 干法 1. 管上端放一漏斗 2.将硅胶装入 3.轻敲管壁使之填装均匀 湿法 1.将溶剂装入管内， 2.将吸附剂和溶剂 调成浆状，倒入管 中， 3.使溶剂流出，吸附剂下沉 吸附剂 种类：氧化铝、硅胶，氧化镁、碳酸钙和活性炭等。 氧化铝有酸、碱、中性。适用于不同类型化合物的分离。 硅胶没有酸碱性之分，可适用于各类有机物的分离。 吸附剂的选择 a.与被吸附物及展开剂均无化学作用（首要） b.吸附能力的大小（颗粒大小） c.吸附剂的活性（含水量） d.分子极性 干法 湿法 适用范围 任何化合物 溶于小极性溶剂的化合物 操作 1.将溶剂旋干 2.加少量溶剂溶解（样品溶解性好） 3.加入硅胶吸附至硅胶 不附着在瓶壁上 4.旋干 样品溶液用滴管均匀加入 优点 保证样品层很平整 样品紧实，不易产生裂缝 缺点 硅胶和样品间易产生气泡 适用范围窄 上样 2. 3.淋洗 洗脱剂的选择：根据点板的比移值（简称Rf值）。 洗脱剂极性比较： 己烷、石油醚环己烷四氯化碳三氟乙烯二硫化碳甲苯苯二氯甲烷三氯甲烷乙醚乙酸乙酯丙酮丙醇乙醇甲醇水吡啶乙酸 4.分类 分类 加压 常压 减压 优点 增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间 分离效果最好 减少硅胶的使用量，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发 缺点 降低分离效果，减少产品的塔板数 分离时间过长，效率过差 有些比较易分解的东西可能得不到而且还必须同时使用水泵抽气 5.收集 根据样品中各组分的吸附能力判断流出的各组分 若为有色物质，观看色带，若无色，点板观察。 收集含目标物的淋洗剂。 确定纯度。 选择无杂质的进行回收。