实时荧光定量PCR(qPCR-RT-PCR)的原理及应用.pptx

2013-11-26;Contents;;PCR技术和荧光检测技术的结合 通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行 标记跟踪，实时在线监控反应过程，通过仪器和相应的软 件分析结果，对待测样品的初始模板进行定量或定性分析。 克服了普通PCR：1、终点定量重复性不好 2、EB有毒，荧光太贵等缺点;PCR技术和荧光检测技术的结合 通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行 标记跟踪，实时在线监控反应过程，通过仪器和相应的软 件分析结果，对待测样品的初始模板进行定量或定性分析。 ;RT-PCR技术的原理及试验流程 ;RT-PCR技术的原理及试验流程 ;RT-PCR反应体系;Monitoring PCR with the SYBR Green I Dye（SYBR Green 法）;SYBR Green法优缺点;RT-PCR技术的原理及试验流程 ;RT-PCR技术的原理及试验流程 ;TaqMan探针法优缺点; ?绝??定量(Absolute Quantification，AQ) 病原体检测 转基因食品检测 基因表达研究 ?相对定量(Relative Quantification，RQ) 基因在不同组织中的表达差异 药物疗效考核 耐药性研究 ;相对定量通过内标定量;PCR分四个阶段;如何定量？;如何定量？;如何定量？; RT-PCR技术的数据分析; RT-PCR技术的数据分析;相对定量分析方法 -ΔΔCt;SYBR Green 熔解曲线分析;临床疾病诊断：各型肝炎、艾滋病、禽流感等传染病诊断和疗效评价；肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断；遗传基因检测实现遗传病诊断。 动物疾病检测：禽流感、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等。 食品安全：食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。 科学研究：医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究。 应用行业：各级各类医疗机构、大学及研究所、检验检疫局、兽医站、食品企业及乳品厂等。