定性检测人血清中的抗结核分枝杆菌特异性抗原的IgG抗体.ppt

操作二、真菌形态结构的观察 操作二、真菌形态结构的观察 操作二、真菌形态结构的观察 操作二、真菌形态结构的观察 操作二、真菌形态结构的观察 操作二、真菌形态结构的观察 操作二、真菌形态结构的观察 操作三、皮肤癣菌(或青酶菌)的观察 1、将病发或皮屑放于载玻片上，滴加1～2滴10～20% NaOH溶液。 2、加以盖玻片。在弱火上微微加热，以下不沸为度，（加速角质溶解，使标本透明）。 3、在盖玻片上轻轻加压，按一下盖玻片，用滤纸吸去周围溢液。 4、先在低倍镜下观察到被检物后，转换高倍镜观察。 【思考题】 一、查见标本抗酸染色阳性细菌即可报告感染结核杆菌吗？为什么？ 二、结核杆菌培养接种前为什么要进行标本前处理？其培养要求与普通细菌培养有何不同？为什么？ 【病案讨论】 患者XXX，女，23岁，公共汽车司机。　 主诉：劳累半月后反复咯血3天伴疲乏。　 现病史：患者近半月来常感劳累、疲乏，时有夜间盗汗，食欲下降，未加以注意，照常上班。3天前下夜班后，感胸部闷痒，咳嗽、咯血，为整口鲜血，咳10余口，约10 ml。自觉无发热。到某诊所就医，静脉点滴止血敏治疗2天，仍间断咯血，咳少量白粘痰液。来我院就诊，以“右下叶背段浸润型肺结核”收入院。 　 患者入院后精神、食欲欠佳，二便正常，睡眠尚可，体重无进行性减轻。　　既往史：对酒精过敏。　　体格检查：体温37.4℃，脉搏90次/min，呼吸20次/min，血压110/70mmHg。神志清楚，自动体位，全身浅表淋巴结未触及。右下肺背部可闻及少量湿啰音。心率90次/min，律齐。腹软，肝脾肋下未触及，四肢及脊柱正常。 　　辅助检查：血常规正常。血沉35 mm/h。痰涂片查抗酸杆菌阳性。后前位胸片示右中肺野斑片状密度增高影，其间可见透光区。右侧位片示病灶位于右下叶背段，可见空洞。讨论：1．该患者患的是什么疾病？病原体是什么？有无可能出现耐药？机制是什么？ 2．诊断依据是什么？ 一、讨论： 1、主要呼吸道感染细菌 2、结核杆菌实验室检测方法 3、真菌的检查方法、病毒检查法（自学） 二、示教： 1、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌形态染色 2、分支杆菌的检查：结核杆菌的培养 三、操作： 1、抗酸染色 2、真菌形态结构的观察 3、皮肤癣菌（或青酶菌）的观察 实验五 呼吸道感染细菌、真菌及病毒检查法 G+ S. pneumoniae G- Neisseria meningitidis Mycobacterium tuberculosis 1-1. 呼吸道感染细菌形态 脑膜炎球菌致病物质 致病作用 荚膜 抗吞噬作用 菌毛 黏附作用 脂寡糖LOS 毛细血管坏死、出血、瘀点、瘀斑及微循环障碍,严重的致DIC IgA1酶 分解粘膜局部分泌型IgA 流脑：人唯一易感宿主；飞沫传播、冬春季发病，5Y以下易感，尤6M~2Y；上呼吸道感染、败血症、脑脊髓膜炎：寒战、高热、呕吐、拒食、烦躁不安；剧烈头痛、喷射状呕吐、颈项强直等 1-2. 主要呼吸道细菌致病物质（自主复习） 肺炎链球菌致病物质 致病作用 荚膜 抗吞噬作用 肺炎链球菌溶素O 膜上打孔，溶解人、羊等RBC 脂磷壁酸 黏附作用 神经氨酸酶 分解细胞膜神经氨酸，定植和扩散有关。 肺炎链球菌致病：大叶性肺炎、支气管炎 ，可继发中耳炎、脑膜炎和败血症等。 1-2. 主要呼吸道细菌致病物质（自主复习） 2.结核杆菌的实验室检测方法 萋尼抗酸染色+荧光染色 罗氏培养+分枝杆菌快速培养 抗原抗体检测 细胞因子检测 荧光定量PCR 芯片杂交 病原学 免疫学 分子生物学 2-1-1.结核杆菌涂片镜检--抗酸染色（ fast-acid stain ） 原理 结核杆菌对苯胺染料一般不易着色，但经加温或延长染色时间后能抵抗3％盐酸乙醇的脱色作用。经此法染色后，结核杆菌及其他分枝杆菌呈红色，非抗酸菌呈蓝色。 抗酸染色局限性 抗酸染色对分枝杆菌非特异，其他如奴卡、红球菌属）、军团菌、隐孢子虫、等孢球虫等有抗酸菌特点可成阳性 不能区分结核和非结核分枝杆菌 不能区分活菌和死菌 敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000条菌时可检出，大于10万/mL痰检出率高（培养可检出10-100条菌） 2-1-2.结核杆菌荧光染色 荧光染色法：抗酸性菌用荧光染料Auramine O(金胺O)染色后，用含有紫外光源的荧光显微镜检查，将会发出闪亮的橘黄颜色。 ? 低倍镜检，快速、简便易行，但不具特异性。? 附：液基夹层杯结核杆菌检验工作原理 将经过消化灭活处理液处理的痰液、或其他体液标本混悬液置于具有符合光学要求基片的夹层杯中，经过专业离心机离心将混