大学生生物学试验技能竞赛比赛科目.doc

PAGE PAGE 4 附件3: 第二届大学生生物学实验技能 竞赛科目指南 科目一： Hucker 改良的革兰氏染色法鉴定微生物 一、实验器材 1、设备：显微镜（尼康YS100、YS2-H、麦克奥迪BA210） 2、材料：酒精灯、接种环、载玻片、盖片、擦镜纸、白纸、滤纸、废液缸（1000ml烧杯）、废物盒、革兰氏染色液（结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红液）、生理盐水、香柏油、二甲苯 3、菌种：（1）大肠杆菌；（2）枯草芽孢杆菌 二、实验步骤 1、涂片 取一块洁净载玻片，在载玻片的左、中、右3处各滴加一小滴生理盐水，且均匀分布，用接种环以无菌操作分别从大肠杆菌和枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于左、右一水滴中，从大肠杆菌斜面和枯草芽孢杆菌斜面上各挑取少许菌苔同置于中间一水滴中，分别混匀并涂成薄膜。 2、干燥 室温自然干燥。 3、固定 涂面朝上，通过火焰2-3次。 此操作目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。 4、初染 滴加结晶紫液，以刚好将菌膜覆盖为宜，染色1-2min，水洗。 5、媒染 用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。 6、脱色 用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95%乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。 7、复染 用番红液复染约2min，水洗。 8、镜检 干燥后，用油镜观察，