新基因功能研究的略与方法.pptVIP

免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。 该方法的优点是：相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，所处的环境条件也是接近天然状态的，能够反映体内的相互作用情况，也可以分离到天然状态的相互作用蛋白复合物。但应该注意，有时免疫共沉淀的蛋白质并非是直接相互作用，如ElA与p107的共沉淀就是间接的相互作用，这实际上是ElA与p107、p107与cyclin A直接相互作用的结果。另外，其灵敏度也相对较低。 是一种基于转录重建而建立的研究生物大分子相互作用的简便而有效的研究方法。其最大优势在于它可以用已经克隆的基因从特定细胞的2HIE表达文库中“钓取”与其编码产物相互作用的蛋白质及相应基因序列。它检测的相互作用在体内发生，无需额外的纯化步骤。但也存在不少局限性，如突出的“假阳性”问题以及所分析的蛋白质必须定位于核内才能激活报告基因（不利于核外蛋白间相互作用的研究）等。另外，融合蛋白的构建也很可能会影响到蛋白质的正确折叠。另外，近年来已初步建立了哺乳动物双杂交系统，以更好地模拟细胞内环境，探明蛋白质相互作用的机理。 * 随着生命科学的发展及研究领域的不断开拓和生物医学研究在分子水平上的不断深入和推进，越来越多的未知新基因和基因的新功能被发现,越来越多的新基因被得以成功克隆，因此对新基因功