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目的：研究知母皂苷活血化瘀作用的分子机制 结果：知母皂苷作用于血管内皮细胞后,血管紧张素酶原(AGT) 基因、肾上腺素α2A受体基因和内皮素转换酶–1基因的表达均有不同程度的下调。 结论：知母皂苷有调控血管内皮细胞功能的作用,可能是其治疗心血管疾病的机制之一。 寡核苷酸探针的设计 寡核苷酸合成 芯片的制备与后处理 知母总皂苷的提取 血管内皮细胞的培养及给药 总RNA 的提取 荧光标记cDNA 的合成 杂交和洗涤 检测和分析 1、芯片检测的灵敏度 2、探针浓度对杂交信号的影响 3、芯片杂交的特异性 4 、芯片检测的重复性 5 、知母皂苷对基因表达的影响 未用药处理的内皮细胞总RNA 的反转录用Cy3–dUTP 标记,知母皂苷处理内皮细胞总RNA 的反转录用Cy5–dUTP 标记。下图显示了Cy3–dUTP 和Cy5–dUTP 标记cDNA 与芯片杂交的结果,黄色的表示用药后表达水平无变化,绿色的表示用药后表达水平下调。 用4 个看家基因和阳性内标对Cy3 和Cy5 的信号值进行了归一化处理,并确定Cy3 和Cy5 的比值大于2.0 或小于0.5 为差异表达的标准。据此标准,80 mg/L 知母总皂苷作用于人血管内皮细胞后,血管紧张素酶原(AGT) 、肾上腺素α2A 受体和内皮素转换酶–1的表达都下调。 血管内皮具有一系列重要的生理功能,参与机体的血压调节、血