琼脂糖凝胶电泳在核酸研究中的应用.ppt

DNA的琼脂糖凝胶电泳分离 带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。 与蛋白质分子相似，核酸分子也是两性解离分子，在pH8.0-8.3时，碱基几乎不解离，磷酸根全部解离，核酸分子带负电荷，向正极移动。 分子在电场作用下的迁移速度，与电场强度和电泳分子所携带的净电荷数成正比。不同大小和构象的核酸分子的电荷密度大致相同，在自由泳动时各核酸分子的迁移率区别很小，难以分开。所以采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，发挥分子筛的功能，使得大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大差异，达到分离目的，在loading buffer的作用下，可观察电泳的进行情况。 垂板电泳槽 转移电泳槽 平板电泳槽 双向电泳槽 电泳操作步骤 2、胶床准备 ①取出胶床和梳齿，将梳子垂直插入到胶床的小凹槽内，梳齿底端和床面有一定的间隙 ③将胶床放在调整好的水平台上 1、凝胶准备 用1×TAE配制1.2％琼脂糖凝胶。 ① 称1.2 g琼脂糖置三角瓶中，加100ml，1×TAE ② 微波炉加热大约1-2分钟，熔化琼脂糖 ③