生化分析仪的参数设置.doc

生化分析仪的参数设置 1.分析方法? 常见的分析方法有：终点分析法、连续监测法、比浊测定法。1.1 终点分析法1.1.1 一点终点法?? ? 该法的特点是使用一种或两种试剂，待测定物与试剂反应达到终点时，测定吸光度，计算待测物的浓度。该法常见的有总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法、葡萄糖氧化酶法。1.1.2 两点终点法?? ? 也称固定时间法。在单试剂分析中，该法可以消除样品以及试剂的颜色、浊度的干扰，其原理是在样品与试剂混合后的延滞期后读取一个点A1，一定时间后读取A2，ΔA=A2-A1，然后比较标准和测定的ΔA值，求得待测物的浓度。单试剂分析常见的有肌酐苦味酸法。在双试剂分析中，该法还具有消除内源性物质测定的干扰，其原理是加入试剂1后读取A1，加入试剂2后读取A2，A1相当于读出样品空白值，A2才是实际呈色反应，因此ΔA=A2-A1。1.2 连续监测法?? ? 其原理是在酶促反应的最适条件下，用物理、化学或酶促反应的分析方法，在反应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定反应时间内底物或产物量的变化，以单位时间酶反应初速度计算出酶活力的大小和代谢物的浓度。其具体方法有两点速率法和多点速率法。1.2.1 两点速率法?? ? 观察在零级反应期内两个时间点的吸光度，用两个点的吸光度的差值（ΔA）除以时间（分），计算出每分钟的吸光度变化值。1.2.2 多点速率法?? ? 在酶促反应进程的零级反应期内每隔一定时间（2-30s)进行一次监测，连续监测多次，求出单位时间内的反应速度。1.3 比浊测定法?? ? 自动化生化分析仪一般只能做透射比浊分析，其原理是在光源的光路方向测量透过光强度，它常用于终点法测定，目前应用较多的为免疫透射比浊法。目前主要用于血清特种蛋白的检测，如载脂蛋白、微量蛋白、急性时相反应蛋白、免疫球蛋白以及某些药物监测等。 2. 温度? 一般生化分析仪的恒温控制器可以对25℃、30℃、37℃三种温度进行恒温，根据需要可以任意选择。由于酶在达到最适温度以前，温度每升高10℃，反应速率增加1-2倍，因此IFCC推荐酶测定时的温度设置为37℃。 3.波长3.1 单波长?? ? 当测定体系中含有一种组分或在混合溶液中待测组分的吸收峰与其他共存物质的吸收波长无重叠时，可选用。如果一个物质有几个吸收峰，可选用吸光度最大的一个波长，或者选择在吸收峰处吸光度随波长变化较少的某个波长。3.2 双波长?? ? 当被检溶液混浊或存在较多的干扰物质时，测定时会出现光散射和非特异性光吸收，从而影响测定结果的准确性，此时可用双波长测定，以提高测定结果的准确性，而在实际应用中选择辅助波长主要用于消除脂血、溶血、黄疸的干扰。由于脂质、血红蛋白、胆红素在较宽的波长范围内有较强的光吸收，常常同测定波长有重叠，此时测得的吸光度包含待测物质的吸光度和干扰物质的吸光度，因此选用合适的辅助波长可以消除干扰物质的吸光度。辅助波长的设置原则是根据测定波长选择辅助波长，要求干扰物质在测定波长同辅助波长有相同的吸光度。 4. 样品量和试剂量? 样品和试剂量的设置原则一般是根据试剂说明书上的比例，并结合仪器的特性进行设置。仪器的特性包括：样品和试剂的最小加样量及加量范围、最小反应液的体积等。在实际工作中为节约成本可以根据比例缩小样品和试剂用量，但同时必须满足最小反应液总量。但值得注意的是，样品量不应少于3μl，否则测试结果的重复性差。 5. 稀释水量? 添加样品稀释水的目的是为了洗出粘附在采样针内壁上的微量血清，减少加样误差，添加试剂稀释水的为了避免试剂间交叉污染，两种稀释水的量应在复溶试剂时按比例扣除。如用液体试剂盒时因不再加水，无法扣除稀释水量，所以两种稀释水的量应尽量减少，以免试剂被过量稀释。 6. 孵育时间?? ? 在终点分析法中，孵育时间的选择应充分考虑到干扰问题。在白蛋白溴甲酚绿法中，血清中α1-球蛋白、转铁蛋白、触珠蛋白等亦可与溴甲酚绿呈色，但其反应速率较白蛋白为慢，而实际上，当血清与白蛋白混合时，“慢反应”已经发生，因此在溴甲酚绿与血清混合后30s读吸光度可明显减少非特异性结合反应。在葡萄糖氧化酶法中，葡萄糖氧化酶高特异性催化β-D-葡萄糖，而血清中葡萄糖α和β构型各占36%和64%，要使葡萄糖完全反应，必须延长孵育时间使α-葡萄糖变旋为β构型。此外，总胆固醇、甘油三酯都采用酶法的Trinder反应进行测定，但该反应37℃反应较慢，必须测定这些酶试剂反应达到终点的时间，自动分析仪用试剂盒一般可以在全部加样后5min内反应完全，所以应该选择分析仪的最大反应时间。 7. 延迟时间???? ? 在酶促反应一开始的阶段，由于各种因素的影响，酶促反应速率比较慢，可以是几秒到几分钟，尤其是双底物反应或需要辅酶参与者，