植物组织培养实用术.pptVIP

龙牙百合特征:鳞茎，无皮，广卵形，外部鳞片长,将整个鳞茎包裹，直径5~15厘米，白色，茎高90厘米左右，直立茎上叶多而散生，披针形，叶色从浓绿，光滑。花单生茎顶。花朵呈喇叭状长筒形，白色，有清香。 一、外植体的选择 龙牙百合的许多器官、组织都可作为外植体，如鳞片、花梗、叶片、茎尖、腋芽、花瓣、花托、花丝、花药、胚、子房、根尖等，其中采用鳞片作外植体的较多。 以鳞片为例，在选取外植体时，要选择具备龙牙百合品种特征、无病虫害危害的种球。外部鳞片易污染要将其剥离，中部鳞片肉质厚，生长势强，易诱导小鳞茎，是最佳的外植体。内部鳞片幼嫩，诱导率低，不易产生小鳞茎，故不宜采用。就季节性而言，以秋、冬季的鳞片分化成小鳞茎的能力最强， 二、外植体的消毒 由于龙牙百合鳞茎都生长在土中，受土壤微生物的影响，所以一般都会有污染。为此外植体消毒要严加注意，鳞片先用流线形自来水冲洗12小时以上进行预灭菌 再用70%酒精消毒1min，用0.1%升汞消毒10 min 最后用无菌水冲洗4~6次，用无菌吸水纸吸干水分。 三、外植体的原代培养 在同一块鳞片上，其中部被诱导产生小鳞茎的能力最强，诱导出的小鳞茎生长速度也相对较快，而两头位置相对要差些，所以在进行原代培养时，要取已消毒外植体的中部 将其切成1~2cm2大小，背部朝下置于MS+NAA 0.03mg/kg+琼脂0.7%+蔗糖3%培养基上培养。 培养条件为：温度控制在23±2℃，光照控制在300~500Lx进行脱分化，之后温度控制在25±2℃，每天10h小时1500Lx光照。 在龙牙百合组织培养过程中，鳞片诱导产生小鳞茎的过程是比较缓慢的，一般为30天以上，在鳞片上分化出多个肉眼可见的针尖大小的小突起。 40天左右发育成球状的可见鳞片的小鳞茎。 * 植物组织培养实用技术 花卉组织培养实用技术 (以非洲菊为例) 非洲菊组织培养技术 非洲菊属多年生草本花卉。重瓣花，花色有红、橙红、淡红、白色，花色艳丽，可用作切花生产或盆栽观赏。 传统的繁殖方法为播种或分株繁殖，但非洲菊种子寿命短、发芽率低，而且播种繁殖变异率很高，难以得到性状一致的种苗，因而不能用于规模生产；而分株繁殖则存在繁殖慢，易退化和传播病害，也不适于现代的大规模生产，因而目前国外一般都采用组织培养的方法来生产种苗。 一．外植体的选择 1、文献资料综述 茎尖是一种较好的外植体，出愈率最高、繁殖速度快，但取材有限、灭菌很易产生药害。 幼叶、幼叶柄、花梗作为外植体，可诱导产生愈伤组织，但是诱导成苗难。 花托是非洲菊组织培养中比较理想的外植体，其好处在于花托较大，易于剥取，并有花被包裏，污染程度轻，易于消毒，污染率低 首先要选择花大、花色艳丽、市场流行的品种，然后再选择无病虫害、植株生长健壮、花色纯正的优良品种单株进行取材。 作为外植体的花蕾要选取直径在1.0 cm左右，而且未露心的小花蕾，太大或是太小的花蕾均不能获得满意的效果。 2外植体的选择方法 二．外植体的消毒 方法1 　 1、剥去外层萼片，在自来水下冲洗干净 2、置0.15%的升汞溶液中浸泡12~15分钟 3、取出后剥去外部所有萼片,在1%的次氯酸钠溶液中消毒10分钟 4、放入无菌水中充分洗涤3次 方法2 1、剥去外层萼片，在自来水下冲洗干净 2、置70%酒精浸泡30秒 2、用0.1%升汞加数滴吐温浸泡5～8分钟 3、无菌水冲洗6～7次 三．外植体的原代培养 1、将灭菌后的花蕾外植体，剪成1.0cm长的小段 2、在超净工作台上用0.1%氯化汞（HgCl2）对外植体进行表面消毒6~8min，小心倾去氯化汞溶液 3、用无菌水冲洗6~7次 4、接种在MS+BA1㎎/L+IAA0.5mg/L诱导芽培养基上 四．试管苗的增殖与继代培养 培养6~7周以后，愈伤组织上陆续有小芽分化，此时将带有小芽的愈伤组织切成2~4个小块，分别移到MS+BA 0.2～1㎎/L+NAA0.2mg/L﹢KT0.3mg/L诱导芽培养基上。 培养一段时间后，又有小芽陆续分化。培养4周后，把这些继代培养的芽丛分割，并移到新鲜的培养基上。每次继代培养时间约为4周，芽丛的发生力可保持半年左右。在每次继代前，高于3cm的小苗转入培养基：1/2MS+BA1mg/L上，可促进幼苗迅速长大。 注意 1、在初级培养和继代培养时，降低MS中的氮素营养会导致芽的发生率降低，铵态氮和硝态氮之比为1：2时对非洲菊芽的增殖最好。 2、随BA浓度的提高，增殖速度相应提高。但在较高的BA浓度条件下芽苗会变细、变弱，且随BA浓度进一步提高，芽苗变得更加丛生、细弱。 3、生产中在努力提高芽苗增殖率的同时，还应保证分生芽苗的健壮。根据品种不同,一般把增殖率控制在2