实验原核诱导表达及检测分析.docVIP

分子生物学实验II （蛋白质的表达、纯化及检测） 实验一：外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 【实验目的】 通过本实验了解外源基因在原核细胞中诱导表达情况。 【实验原理】 将外源基因克隆在使用含有lac操作子的启动子的表达载体中，让其在E. coli中表达。首先在不加诱导剂的条件下培养宿主菌，lacI基因表达的产生的阻遏蛋白LacI与lac操作子结合，从而不能进行外源基因的表达；然后向培养基中加入诱导物IPTG，此时LacI阻遏蛋白变构失活，不能与lac操作子结合，外源基因表达。 【实验仪器、材料与试剂】 实验仪器：超净工作台、试管、摇床、离心机等。 菌株和质粒：菌株：大肠杆菌BL21；重组质粒pET-30a-X：基因X与pET-30a重组。 主要试剂 50mg/ml 卡那霉素配10ml，用0.22μm滤膜过滤除菌，分成10份，贮存于-20℃ 1M IPTG：将2.4g IPTG溶于10mL ddH2O 中，用0.22μm滤膜过滤除菌，每份1ml，贮存于-20 LB液体培养基 胰蛋白胨（tryptone） 10g 酵母酵母膏（yeast extract） 5 Nacl 10 摇动容器直至溶质完全溶解,用NaOH(1M)调节PH至7.0，加入去离子水至总体积为1L，121℃ 【实验