植物细胞骨架的光学显微镜观察.ppt

实验三 植物细胞骨架的光学显微镜观察一.实验目的 1.掌握考马斯亮蓝R250?对植物细胞骨架染色的方法。 2.?通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。 二.实验原理 细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络 结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、 微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运 输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。 本试验采用去垢剂TritonX-100?的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的 膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后 者用考马斯亮蓝R250?染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。 三.实验用品 四.实验方法步骤 1.撕取洋葱鳞茎内表皮1cm2若干片，置于小烧杯中。 2.用磷酸缓冲液（pH6.8）提前浸泡2小时左右。 3.吸去磷酸缓冲液，用1% TritonX—100处理20分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质，从而使骨架图像更加清晰。 4.吸去TritonX-100，用M-缓冲液洗2次，每次5分钟。M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。 5.用3%戊二醛固定0.5～1h。 6.用磷酸缓冲液（pH6.8）洗2次，每次5分钟。 7.考马斯亮蓝R250?染色3