核仁素与GW112的相互作用的鉴定-第三军医大学学报.doc

核仁素蛋白调节OLFM4mRNA表达的研究 安娜1，吴莉雅1，黄轶2，蒋雪1*，刘先俊1* 1重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，分子医学与肿瘤研究中心，400016 重庆 2重庆医科大学附属儿童医院临床分子诊断中心，400014 重庆 *通讯作者：蒋雪 邮箱： jiangxue868@ 电话 刘先俊 邮箱： lxj6422@ 电话 [摘要] 目的：探讨核仁素（nucleolin，C23或NCL）蛋白与Olfaetomedin4（OLFM4）mRNA之间是否存在相互作用，以及核仁素对OLFM4转录水平的调控。方法：本研究利用RNA染色质免疫共沉淀 （chromatin immunoprecipitation assay ，RNA Chip）结合RT-PCR确定核仁素是否能与OLFM4mRNA相互作用，以及荧光素酶报告基因试验检测核仁素对OLFM4报告基因的影响。结果：在SGC-7901细胞内，核仁素能与OLFM4mRNA结合，且核仁素对OLFM4具正向调节作用。结论：核仁素与OLFM4mRNA可以相互结合，且核仁素可以通过增加OLFM4转录水平和延长OLFM4mRNA的半衰期来增加OLFM4mRNA的稳定性。 [关键词] 核仁素；OLFM4；RNA染色质免疫共沉淀（RNA Chip）；双荧光素酶报告基因试验 The Study of Nucleolin protein regulating OLFM4mRNA Expression An Na, Wu Liya, Huang Yi, Jiang Xue, Liu Xianjun Department of biochemistry and molecular biology, Chongqing Medical University, Chongqing, 400016 [Abstract] Objective To explore the interaction between olfaetomedin4(OLFM4) mRNA and nucleolin protein, and the regulatory of nucleolin protein on the Transcription level of OLFM4. Methods We performed chromatin immunoprecipitation assay （RNA chip）with RT-PCR to identify whether OLFM4 interacted with nucleolin, and the effects of nucleolin on the OLFM4 were detected by dual-luciferase reporter assay. Results OLFM4 directly interacted with the nucleolin in SGC-7901 cells, nucleolin had positive moderating effect on OLFM4. Conclusion OLFM4 directly interacted with the nucleolin, and nucleolin stabilizes the OLFM4mRNA by Increasing OLFM4 transcription and extending OLFM4mRNA half-life. [Key words] OLFM4; nucleolin; RNA chip; Dual-luciferase reporter assay Olfaetomedin4（OLFM4）是在胃癌细胞特异高表达的分泌性糖蛋白分子，与肿瘤的恶性程度、侵袭及转移密切相关。OLFM4mRNA在细胞内水平的改变，一定程度上可以反映细胞抗凋亡或进行凋亡的情况。而OLFM4mRNA水平的高低除了与转录的调控机制有关以外，也和mRNA降解机制有关[1]，目前OLFM4的研究尚处初期。 核仁素（nucleolin, C23或NCL）是真核细胞核仁中最主要的一种磷酸蛋白质，与细胞的多种代谢过程有关。序列分析发现，核仁素包含三个不同功能结构域，中间区含多个RNA结合结构域[2]。目前报道证实，核仁素通过与mRNA3′非翻译区（3′-untranslation regions，3′UTR）富含AU的元件相互作用，增加抗凋亡蛋白bcl-2、Bcl-XL和β-球蛋白mRNA的稳定性[3-5]。迄今为止，OLFM4与核仁素的关系仍未得到证实。 1