大肠菌群的测定论文.doc

PAGE 大肠菌群的测定论文 目录 1 普通光学显微镜的使用 2 微生物大小的测定 3 微生物直接计数法 4 细菌的简单染色和革兰氏染色法 5 常用玻璃器皿的清洗及包扎 6 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 7灭菌 8 微生物溶液的十倍稀释法 9微生物平板菌落计数法 10 微生物的分离、接种和培养 大型实验： 水中细菌总数和大肠菌群的检测 厌氧菌的分离、培养及鉴定 第一节 普通光学显微镜的使用 一．实验器材 普通光学显微镜，切片标本，香柏油，二甲苯，擦镜纸。 二．实验步骤 图？ 显微镜的结构 1-目镜 2-镜筒 3.物镜转换器 4.物镜 5.通光孔 6.聚光器 7.光圈 8.反光镜 9.粗调节器?? 10.细调节器 11.镜臂 12.推进器 13.载物台 14.倾斜关节?? 15.镜柱?? 16.镜座?? 17. 照明装置??? 18.粗调限位环凸柄 (一)低倍镜的使用 1. 把显微镜放在桌面的左侧，镜臂对向胸前，坐下进行操作。用手转动粗调螺旋，使镜筒上升，然后转动物镜转换器，使低倍镜对准镜台中央圆孔（当转动到听见“咔”声响，或同时亦感到有阻力时立即停止转动，说明物镜已与镜筒成一直线）。 2. 对光：拨动聚光镜底部圆环的小柄，使光栏完全打开。旋转聚光镜升降螺旋，使聚光镜上升到和镜台相平。用左眼（两个眼睛都要睁开）在目镜上观察，同时用手调整反光镜，对好光源。要求视野达到完全均匀明亮。 3. 放置玻片标本：取玻片标本放在镜台上，有盖玻片的一面朝上。玻片两端用移动器夹住，然后转动螺旋，使玻片上要观察的标本对准镜中央圆孔。注意，镜台上的刻度可以标示玻片的坐标位置。 4. 调节物距：转动粗调螺旋，使低倍镜距玻片标本0.5mm左右。注意：必须从显微镜侧面观察物镜与玻片的距离。切勿用眼在目镜上观察的同时转动粗调螺旋，以防镜头碰撞玻片造成损坏。用左眼从目镜上观察，用手慢慢转动粗调螺旋下降镜台，当视野中出现物像时，再调节细调螺旋，直至视野中出现清晰的物像（许多椭圆形的红细胞）为止。如果物像不在视野中央，可稍微移动玻片位置（注意：移动玻片的方向与观察物像移动的方向恰好是相反的）。 5、使用推动器移动标本认真观察标本各部分，寻找要观察的目标。 (二)高倍镜的使用 1. 一定要先在低倍镜下找到要观察的标本物像后，并把要放大的部分移至视野正中，同时调节到最清晰程度，才能进行高倍镜的观察。 2. 转动物镜转换器，用高倍镜（40×）观察。使高倍镜转到镜台中央圆孔处。转换高倍镜时速度要慢，要细心，并从侧面进行观察（防止高倍镜碰撞玻片）。如果高倍镜碰到玻片，说明低倍镜的物距没有调节好，应重新进行操作。 3. 调节物距：转换好高倍镜后，用左眼在目镜上观察。这时物像往往不清楚、或者要观察的部分不在视野当中，可用细调螺旋慢慢向上或向下转动（切勿用粗调螺旋）即能清楚看到物像。一般只需转动半圈或一圈就能达到要求。 注意：此过程中不动任何旋钮，只用细调节器稍加调节，就可获得清晰的图像。转动转换器时，不要用手指直接扳动物镜镜头。 (三)油镜的使用 1. 首先在高倍镜下找到所要观察的标本后，把所要观察的部分移至视野中央。 2. 转动物镜转换器，移开高倍镜，调转高倍镜（40×）和油镜（100×）呈“八”字，在标本上所要观察的位置加一滴镜油（香柏油）。 3. 转动物镜转换器，转换油镜，使之对准镜台中央圆孔处，旋进油镜。调节光线至最大光圈。 4. 转换好油镜后，用左眼在目镜上观察。物像如不清楚，可用细调螺旋慢慢向上或向下转动，直至视野中出现清晰的物像。如仍看不清标本，需重新用低倍镜、高倍镜观察，然后再转换油镜。 （四）观察完毕的处理 油镜镜头：先用干净擦镜纸擦1～2次，然后用二甲苯润湿擦镜纸，再擦1次，最后再用干净的擦镜纸擦2次。擦拭镜头应顺着一个方向擦，不能来回擦拭。 切片标本：先用吸水纸擦去香柏油；再滴一滴二甲苯在上面，用吸水纸擦去，最后用水清洗。 显微镜：物镜镜头转成“八”字形，下降载物台至最低点，取下切片标本，关闭开关，拔掉电源线，如实填写使用情况，填罩上皮罩。将显微镜放回镜箱。搬动显微镜时应一手握镜臂，一手托镜座。 （五）使用显微镜注意事项 1. 持镜时要一手紧握镜臂，一手托住镜座，绝不能一把提起显微镜便走，以防目镜从镜筒滑出或反光镜脱落。 2. 轻拿轻放，不要把显微镜放在实验台边缘，防止碰翻落地。 3. 显微镜光学系统部件要用清洁的擦镜纸轻轻揩擦，切勿口吹、手抹或用粗布揩擦。 4. 使用时先用低倍镜调整光线。观察活体标本或染色较浅的标本时，要适当关小可变光栏便视野变暗，方能看得清楚。 5. 放置玻片标本时要对准镜台孔正中央，并且不能反放玻片，如标本玻片反放时高倍镜下看不到物像，并容易压坏玻片或物镜。 6. 观察时要双目睁开，切勿闭上一只眼睛。左眼观察视野，右眼用以绘