生化分析仪常用分析方法共有三大类分别为终点法固定时间法和动力学法.DOC

生化分析仪常用分析方法共有三大类，分别为终点法、固定时间法和动力学法。 终点法： 指经过一段时间的反应，反应达到平衡，由于反应的平衡常数很大，可认为全部底物(被测物)转变成产物，反应液的吸光度不再变化，只与被测物的浓度有关。这类方法通常称为“终点”法，更确切地说应称“平衡”法。 单试剂单波长终点法：t1时刻加入试剂（体积为V），t2刻加入样本 （体积为S），然后搅拌并反应，之后开始测量反应液的吸光度， 在t3时刻反应达到终点，t3－t2为测定时间。 ????反应度R＝At3－At2-1×V/(V＋S)，或R＝At3－ARBLK。 ????其中： Ati为i时刻的吸光度，ARBLK为试剂空白吸光度。 单试剂双波长终点法： 基本上同“单试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。 双试剂单波长终点法：t1时刻加入第一试剂(体积为V1)，t2时刻加入??????????????????????????????????????样本(体积为S)之后立即搅拌，t3时刻加入第二试剂(体积为V2)?????????????????????????????????????????????? 并立即搅拌，t4时刻反应达到终点。t3-t2为孵育时间,t4-t3为测定时间。 在项目参数中，如果反应起始时间设为0，则反应度R=A时刻吸光度-双试剂空白吸光度。????如果反应起始时间小于0，则反应度R=At4 -双试剂空白吸光度-t3到t2间设定点的吸光度×（V1＋S）/(V1＋S＋V2)。 双试剂双波长终点法： 基本上同“双试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。 固定时间法：又称为一级动力学法、二点动力学法等，指在一定的反应时间内，反应速度与底物浓度的一次方成正比，即v=k[S]。由于底物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的变化越来越小。这类反应达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，必需经过一段延迟时间才能进入稳定反应期。 t1时刻加入试剂(体积为V)，之后测量试剂空白的吸光度，t2时刻加入样本(体积为S)，t3时刻反应稳定，t4时刻停止对反应进行监测；t2－t3为延迟时间，t3－t4为测定时间。?????????????????????????????????????????????????????????? 单波长反应度（单双试剂相同）：R=At4—At3???????????????????????????????????????????????????????????????????? 双波长反应度：R=（t4时刻主波长吸光度－t4时刻次波长吸光度）-－（t3时刻主波长吸光度－t3时刻次波长吸光度） 动力学法：又称零级动力学法，指反应速度与底物浓度的零次方成正比，也就是与底物浓度无关。因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度(ΔA/min)与被测物的活性或浓度成正比。动力学法也被称为连续监测法；主要用于酶活性的测定。 ????实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再为零级，因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的；同样，由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，必需经过一段延迟时间才能进入稳定反应期，各试剂商对这两段时间有严格规定。 t1时刻加入试剂(体积为V)，t2时刻加入样本(体积为S)，t3时刻反应稳定，tn时刻停止对反应进行监测；t3-t2为延迟时间，tn-t3为测定时间。 单波长反应度（单双试剂相同）R＝（n∑AT－∑A∑T）/［n∑T2－（∑T）2］,其中：n＝t3到tn间的数据个数 ，T＝时间 ， A=某一时间的吸光度。双波长反应度基本同单波长，只是某一时间的吸光度等于主波长吸光度减去次波长吸光度。 第二章 生化自动化分析方法概要 一、分析方法分类 （一）终点法 被测物质在反应过程中完全被转变为产物，即达到反应终点，根据终点吸光度的大小求出被测物浓度，称为终点法（end essay）。实际上被测物并没有完全被转变，而只是与产物达到一个动态的化学平衡，因此该法称为平衡法更为恰当。从时间-吸光度曲线来看，到达反应终点或平衡点时，吸光度将不再变化。分析仪通常在反应终点附近连续选择两个吸光度值，求出其平均值计算结果，并可根据两点的吸光度差来判断反应是否到达反应终点。终点法参数设置简单，反应时间一般较长，精密度较好。 终点时间的确定：①根据时间-吸光度曲线来确定，如Trinder反应测定尿酸，反应曲线上3～5min时其吸