CRISPRCas9介导的猪Six1和Six4基因敲除细胞系的建立-南京医科大学.PDFVIP

第38卷第2期 南京医科大学学报（自然科学版） 2018年2月 ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING（NaturalScience） ·143 · CRISPR/Cas9介导的猪Six1和Six4基因敲除细胞系的建立 王俊政，李艳如，赵丽华，刘曼菱，张曼玲，金 永，陈俏羽，王晨宇，尤志欢，李荣凤* 南京医科大学江苏省异种移植重点实验室，江苏 南京 211166 ［摘 要］ 目的：利用干细胞囊胚互补技术再生同种或异种动物器官已得到验证，其重要的前提是需要构建出相应的器官缺 失动物模型。本文拟通过CRISPR/Cas9基因编辑技术建立猪Six1单基因和Six1/Six4双基因敲除猪细胞系，为构建肾脏发育缺 陷和缺失猪模型奠定重要的研究基础。方法：选取猪Six1基因和Six4基因第一外显子为敲除靶点，分别设计并合成单导向 RNA（singleguideRNA，sgRNA），将其插入含有Cas9骨架的PX330质粒，分别构建Six1基因和Six4基因敲除打靶载体PX330⁃ sgRNA1和PX330⁃sgRNA4；用T7EN1酶验证打靶载体敲除效率后，将高效打