食品中致病菌大肠艾希氏菌的检测.docVIP

食品中致病菌大肠艾希氏菌的检测 　　食品中病原菌的检验主要包括食品原料及食品中各种病原菌的检验，如金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、肉毒梭菌及毒素、巴氏杆菌等19种病原菌。在此只介绍大肠希氏菌的检验，以掌握病原性大肠艾希氏菌检验的原理和方法。 　　病原性大肠艾希氏菌检验原理 　　正常情况下，大肠艾希氏菌不致病，而且还能合成维生素B和K，生产大肠菌素，对机体有利。但当机体抵抗力下降或大肠艾希氏菌侵入肠外组织或器官时，可作为条件性致病菌而引起肠道外感染。有些血清型可引起肠道感染，已知的引起致病性大肠艾希氏菌有四类，即产肠毒素大肠艾希氏菌、出血性大肠艾希氏菌、肠道侵袭性大肠艾希氏菌和肠道致病性大肠艾希氏菌，后者主要引起新生儿的腹泻。带菌的牛和猪是传播本菌引起食物中毒的重要原因，人的带菌亦可污染食品，引起中毒。 　　病原性大肠艾希氏菌检测方法 　　一、增菌 　　样品采集后应尽快检验。以无菌操作称取检样25 g，加在225 mL营养肉汤中，以均质器打碎1 min或用乳钵加灭菌砂磨碎。取出适量，接种乳糖胆盐培养基，以测定大肠菌群MPN，其余的移入500 mL广口瓶内，于36土1 ℃培养6 h。挑取1环，接种于1管30 mL肠道菌增菌肉场内，于42 ℃培养18 h。 　　二、分离 　　将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板;污染严重的检样，可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美蓝平板，于36土1 ℃培养18 h一24 h，观察菌落。不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。 　　三、生化试验 　　1. 自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁(TSl)或克氏双糖铁琼脂(KI)。同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH 7.2尿素、琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验 培养基。以上培养物均在36 ℃培养过夜。 　　2. TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，H2S阴性，KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠艾希氏菌。TSI底层不产酸，或H2S、KCN、尿素有任一项为阳性的培养物，均非大肠艾希氏菌。必要时做氧化酶试验或革兰氏染色镜检。 　　四、血清学试验 　　1. 假定试验 　　挑取经生化试验证实为大肠艾希氏菌的琼脂培养物，用致病性大肠艾希氏菌、侵袭性大肠艾希氏苗、产肠毒素大肠艾希氏菌多价O血清和出血性大肠艾希氏苗O157，血清做玻片凝集试验。当与某一种多价O血清凝集时，再与该多价血清所包含的单价O血清做试验。如与某一个单价O血清呈现强凝集反应，即为假定试验阳性。 　　2. 证实实验 　　制备O抗原悬液，稀释至与MacFarland 3号比浊管相当的浓度。原效价为1:160—1:320的O血清，用0.%盐水稀释至1:40。稀释血清与抗原悬液在10 mm×75 mm试管内等量混合，做试管凝集试验。混匀后放于50 ℃水浴箱内，经16 h后观察结果。如出现凝集，可证实为该O抗原。