生物化学与分子生物学试验技术.ppt

生物化学与分子生物学实验技术 目 录 前 言 1.2 生化实验室的基本设施与装备 第一章：生物化学与分子生物学中的定量分析 （二）生化与分子生物学中常用的滴定法 指示剂的选择 强酸滴定弱碱 选甲基橙 强碱滴定弱酸 选酚酞 强酸滴定强碱 酚酞或甲基橙 滴定终点的判断 强酸滴定强碱 强碱滴定强酸 （2）高锰酸钾法 高锰酸钾是强氧化剂之一。在酸性溶液中能被还原成二价锰。溶液的酸度以控制在1-2mol/L为宜。 MnO4- + 8H+ + 5e Mn2+ + 4H2O 在中性或微酸性溶液中，高锰酸钾也可以被还原，获得3个电子还原为二氧化锰。 MnO4- + 2H2O + 3e MnO2 + 4OH- （3）碘量法 碘量法是以点作为氧化剂，或用碘化物作为还原剂，进行氧化还原滴定的方法。 用I2作为标准溶液，直接进行滴定称为直接碘量法。 I2 + 2e 2I- 用碘化物作为还原剂，通过Na2S2O3标准溶液滴定生成I2，或用Na2S2O3标准溶液滴定剩余的I2，称为间接碘量法。 I2 + 2S2O3 2- 2I- + S4O62- （三）滴定方式 （1）直接滴定法 所用化学反应能满足滴定要求时，可直接用标准溶液滴定，称为直接滴定法。如用盐酸标准溶液滴定氢氧化钠试样溶液等。 （2）返滴定法 又称回滴定法。如反应速度较慢或反应物是固体，滴定剂加入样品后反应无法在瞬间定量完成，可先加入一定量的过量标准溶液，使样品溶解后再用滴定剂滴定。 如测定固体碳酸钙先加入过量盐酸标准溶液溶解样品，再用氢氧化钠标准溶液返滴定剩余的盐酸。 （3）置换滴定法 对于不按照化学计量关系反应的物质可通过其他化学反应间接进行滴定。置换滴定法是加入适当试剂与待测物质反应，使其被定量的置换成另外一种可直接滴定的物质，再用标准溶液滴定此生成物。 （4）间接滴定法 除了返滴定法和置换滴定法，有时还用其它化学反应间接进行测定。如Ca2+ 可通过沉淀CaC2O4，溶于酸后，用高锰酸钾标准溶液滴定间接测定Ca2+ 含量。 相对误差（relative error）： 为了反映误差在测量结果中所占的比例，分析工作中经常使用相对误差。相对误差是以真实值的大小为基础表示的误差值，没有单位。 δ/μ=(x-μ)/μ 通常以%，‰ 或 ppm表示。 例如：测定纯NaCl中Cl的百分含量为60.52%，而其真实含量（理论值）为60.66%。则 绝对误差=60.52%?60.66% = -0.14% 相对误差=[（60.52% ? 60.66%） / 60.66% ]×1000 ‰ = -2.3 ‰ 如果不知道真实值，而知道绝对误差值，则相对误差也可以表示为： 相对误差 = δ × 100% x 例如：用分析天平称两个重量，一个是0.0021g，另一个是0.5432g，两个重量的绝对误差都是0.0001g，可是相对误差却大不相同，一个是（1/21 ）×100%，另一个是（1/5432 ）×100%。 可见，由于两个被测组分含量高低不同，即使绝对误差相同，相对误差也不同。对高含量组分测定的相对误差应当要求小些，低含量组分测定的相对误差要求允许大些。 例如：用重量法和滴定法测量样品主要成分，相对误差需要达到千分之一，而用比色法测定样品重微量成分时，相对误差只要求达到百分之几即可。 5.提高分析准确度的方法 6.减小滴定误差的方法 五、生物化学常用缓冲液 （一）基本概念 ⑴ Bronsted-Lowry酸碱理论（酸碱质子理论）: 1923年由丹麦化学家J.N.Brφnsted和英国化学家T.M.Lowry同时提出了酸碱质子学说，认为凡能释放质子的分子或离子（如：H2O，HCl，NH4+，HSO4- 等）称为酸，凡能接受质子的分子或离子（如：H2O，NH3，Cl-等）称为碱。因此，一种酸释放质子后即成为碱，称为该酸的共轭碱，同样一种碱与质子结合后，形成对应的酸，称为该碱的共轭酸。 如盐酸在水中的解离： HCl Cl- ＋