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（1）显色的一般原则： 一看、首先在日光下观察，画出有色物质的斑点位置； 二照、在紫外灯下观察有无暗斑或荧光斑点 三碘、大部分有机物会吸附碘可逆的产生棕色或黄色斑点 四显、既无色有无紫外吸收的物质，可用显色剂显色 吸附剂的活度和含水量 活性级别 硅胶含水量（%） 氧化铝含水量（%） Ⅰ 0 0 Ⅱ 5 3 Ⅲ 15 6 Ⅳ 25 10 Ⅴ 38 15 常用的氧化铝和硅胶活度为Ⅱ-Ⅲ级。 斑状样品点样的一般点样位置（a = 20mm, b = 10mm, c =两起点之间的距离。 条状样品点样的一般点样位置（a = 20mm, b = 10mm, c = 两起点之间的距离，d = 条的长度）。 点样原点的大小对最后斑点面积的影响较大，故必须严格控制，对于定量分析（按斑点面积定量）时尤其如此，对于较稀的样品溶液在原点进行多次滴加时，更须注意。 4、 展开： 方法： 饱和槽展开和不饱和槽展开 多次展开和一次展开： 用展开剂对薄层展开一次，称为单次展开。若展开一次后分离效果不好，可把薄层板自层析缸中取出，吹开去展开剂，重新放入盛有另一种展开剂的缸中进行第二次展开。 双向和单向展开： 下行展开和上行展开： 是用滤纸条把展开剂引到薄层的顶端使其向下流动，当流到薄层的下端尽头后，再滴到层析缸的底部而贮积起来。 盖子 层析缸 溶剂 薄层板（侧面） 薄层层析装置 1 温度 薄层色谱分析一般在室温中进行。对这过程，温度在20 - 25oC算不上是临界值。 在这过程中无短期的温度波动才是更为重要（避免抽风）。展开室应放置在无直射阳光和不通风处。温度波动对层析结果不利，故不应将展开室放在靠近窗口或热源处。 展开时应注意的几个参数 2 空气湿度 空气湿度极高或极低主要影响有非极性溶剂 体系的无机涂层。相对空气湿度高于70-80%会影响薄层钝化，使Rf值增加。样品点样后，TLC薄层可置放在适当的硫酸和水的混合物的上面不少于30分钟，调整至指定的相对湿度。 另一方面，在样品点样前，TLC/HPTLC板可在105oC再活化30分钟进行干燥。然后薄层必须用一块玻璃板保护起来，只有起点区露出以便于样品点样。 若空气太干燥，可在干燥器中将TLC/HPTLC薄层置于水的上方以达到所要求的状况。 5、显色 （2）显色剂及配制方法 （3）常用的几种显色方法 ① 蒸气显色 ??????????? ? 利用一些物质的蒸气与样品作用而显色，例如，固体碘、浓氨水、液体溴等易挥发物质放在密闭容器内（标本缸、玻璃筒），然后将挥发除去展开剂的薄层放入其中显色。 显色时间与灵敏度随化合物不同而异，多数有机物遇碘蒸气能显黄-黄棕色斑点。 显色作用是碘溶解于测定的化合物，或与化合物发生加成作用，但多数是化合物对碘的吸附作用，是一种非破坏性的显色方法。因此显色后在空气中放置，碘挥发，斑点即褪色。 分析前的准备 （一）背景知识 1. 了解农药有效成分的理化性状 （1）热稳定性、挥发性和极性（判断采用GC法、TLC法、HPLC法） TLC: Thin Layer Chromatography （2）有无吸收或发射光谱特性（判断可否用UV法和HPLC法） 2 了解样品特性 杂质类型、量（判断是否需要前处理和前处理的方法） 3.了解前人的研究工作基础，是否有标准分析方法。 4. 根据现有条件制定分析方案（注意仪器分析要求有标准品，化学分析法不需标准品但定量误差大 ）。 （二）前处理方法 溶解： 原药：直接用溶剂溶解 制剂 水剂：萃取 乳油：溶解后萃取 粉剂、粒剂：溶解 TLC分离助剂和杂质： 适应范围：挥发性小的农药有效成分 原理：吸附色谱；分配色谱。 一般程序：铺板-板活化-点样-展开-显色-定性-溶出 液液分配：挥发性大的农药有效成分 TLC 薄层色谱法 又称薄层层析法，是利用色谱原理在薄层板上对混合物中各组分进行分离、纯化和分析的方法。是把载体均匀地吸附或铺在玻璃板上形成厚度一致的薄层，在其下端点加试样溶液后，放入底部带有溶剂（展开剂或移动相）的层析缸中，展开剂在薄层板上移动至一定高度，使样本中各组分得到分离. 发展历程 1938 伊马洛夫 氧化镁、氧化铝板上分离植物成分 1949 梅赫特 淀粉作粘合剂 1954 柯期纳 玻璃板作为支持板 1957 斯塔尔 改进仪器设备，提出吸附剂规格和操作方法，较快的发展了TLC 样品特点 难挥发的、可溶于一定的溶剂中的样品组分 与柱色谱、纸色谱的关系 薄层色谱是从柱色谱和纸色谱发展而来的，兼有两者的特色；所用固定相与柱色谱相同，但薄层色谱固定相细度更细，所以分离效率比柱色谱高；薄层色谱和纸色谱一样，属于不同色谱柱的“开放式”色谱，但分离速度更快、效率高，所需的设备简单易得，用于定性分析和半定量分析。 应用范围 薄层色谱法曾广泛用于农药残留