四环素调控系统在肿瘤细胞株中的建立和鉴定-解放军医学院学报.pdf

968 军医进修学院学报 J Chinese PLA Postgrad Med Sch Sep 2012，33（9） 四环素调控系统在肿瘤细胞株中的建立和鉴定 1,2 3 2 2 1 常　德 ，由　磊 ，李开龙 ，潘春晓 ，刘长庭 1 2 解放军总医院 南楼呼吸科，北京　100853 ； 北京协和医学院基础学院，中国医学科学院基础医学研究所 3 病理系，北京　100005 ； 北京协和医院 基本外科，北京　100730 摘要 ：目的 建立受四环素及其衍生物强力霉素 (doxycycline，DOX) 诱导调控的高表达外源目的基因的人胰腺癌细胞株。 方 法 构建高效表达转录激活因子 (tTA) 的真核表达载体，利用脂质体转染法导入人胰腺癌细胞株 PANC-1，经嘌呤霉素筛选后 挑取单克隆扩大培养，利用荧光素酶报告基因系统筛选受强力霉素诱导调控的高表达外源目的基因的 PANC-1 细胞株 (Tet- off 细胞株 )，并利用 RT-PCR 和免疫荧光细胞化学法检测 tTA 在 Tet-off 细胞株中的表达。结果 荧光素酶报告基因技术、RT- PCR 和免疫荧光化学染色法检测均表明成功构建了三株受强力霉素高度调控的高表达低背景的 PANC-1 细胞株。结论 成 功获得含四环素调控系统的 Tet-off 人胰腺癌细胞株，其调控活性好、背景低，为研究外源基因功能提供了一条有效途径。 关键词 ：基因表达调控 ；癌症 ；四环素 ；基因功能 中图分类号 ：R 73.3　文献标识码 ：A　文章编号 ：1005-1139(2012)09-0968-04　DOI ：10.3969/j.issn.1005-1139.2012.09.026 网络出版时间：2012-03-06 17:28　　　网络出版地址 ：/kcms/detail/11.3275.R1728.001.html Establishment of tetracycline-controlled gene inducible system in cancer cell line and its identification 1,2 3 2 2 1 CHANG De , YOU Lei , LI Kai-long , PAN Chun-xiao , LIU Chang-ting 1Department of Respiratory Diseases in South Building, Chinese PLA General Hospital, Beij ing 100853, China; 2Department of Pathology, Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences Peking Union Medical College, Beij ing 100005, China; 3Department of General Surgery, Peking Union Medical College Hospital, Beij ing 100730, China Correspondence author: LIU Chang-ting. Email: liuchangt @ Abstract: Objective To establish the tetracycline and its derivatives-controlled inducible gene expression system in human pancreatic cancer line. Methods A eukaryotic expression vector for highly expressed tranactivtor was constructed and transfected into PANC-1 cell line by Fugene HD. Transfected cells were selected in the medium containing 2 µg/