第三章-输血相关传染病病原学标志物检测.pptVIP

* 流程概观：744份样本为例 ~ 30min ~ 30 min ~ 1h ~ 90 min ~ 2.5 hr 准备工作 试剂放置 耗材放置 样本放置 样本汇集 条码读取 样本汇集 核酸提取 荧光扩增反应 结束工作 报告发送 样本处理 仪器维护 实验室清洁 人工操作 仪器操作 更换B盘 转移至 EZbead 浩源检测系统流程总览 转移至 ABI 7500 实验室清洁消毒 序号 位置 消毒液 处理方式 备注 1 仪器表面 纯化水 擦拭 　 2 仪器内部 纯化水 擦拭 　 医用酒精 擦拭 　 紫外灯 照射 　 3 桌面 纯化水 擦拭 　 84消毒液 擦拭 　 4 生物安全柜 纯化水 擦拭 　 84消毒液 擦拭 　 医用酒精 擦拭 　 紫外灯 照射 5 空气 医用酒精 喷洒 　 6 地面 84消毒液 喷洒后拖干净 　 注意 坚决执行物品专取专用，任何用于实验的物品及试剂请戴手套触摸。 污染的类型 前污染： 主要指PCR扩增前的污染。可能来自人员操作误差、标本间污染、使用的试剂、使用的仪器设备、实验室环境等。 后污染： 主要指由扩增产物带来的污染。 防污染措施 污染的预防：包括物理措施及化学措施 前污染预防：以物理措施为主 后污染预防：物理措施和化学措施结合 实验室的规划分区：试剂准备区、标本制备区、扩增区及产物分析区 各区实验仪器、设备、耗材等专用； 人员规范：戴一次性无尘手套；人员在各实验室之间单项走动 操作规范：使用一次性吸头；避免反应液飞溅；加样顺序优化，最后加样本；使用替换或高压处理的加样器；非一次性实验用品合理、规范清洁。 防污染措施 污染源的追踪 试剂污染：阴性对照对反应体系各成份的监测； 环境污染：更换试剂后依然有污染，长期存在； 污染处理 1mol/LHCl擦拭或浸泡可疑器具，使残余DNA脱嘌呤。 紫外照射(UV)法：波长254/300nm,照射半小时即可，只对500bp以上片段有效。 尿嘧啶糖苷酶（UNG）法：含UNG的试剂有助于防止PCR产物引起的污染。方法：50℃,2分钟作用于含有dU的DNA双链或单链，然后开始PCR反应的预变性步骤，同时UNG失活。（100bp作用明显） 防污染措施 乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 人类免疫缺陷病毒 （1型）核酸检测试剂盒（PCR-荧光法） 双内标（DNA/RNA）核酸同时提取，实现检验全过程监控，防止假阴性结果。 国际标准UNG系统 防止PCR产物污染。 防污染措施 使用一次性带滤芯吸头防止样本间交叉污染。 O形圈技术降低了漏液的风险 TADM技术监控每次吸分液的准确性 紫外消毒防污染功能 —每日试验前后开启10分钟。 封闭模块式设计 Hamilton-EZbead检测分析系统独立分区作业设计、配独立紫外功能。 防污染措施 室内质控基本要求 实验室的每一批检测应至少有一个弱阳性室内质控品，该室内质控品应参与混样、核酸纯化、拆分或联检及鉴别检测的全过程。 弱阳性质控品建议浓度为检测系统检测下限的2-5倍（在混样检测的体系中，此检测下限是指混合检测时的检测下限） 基于聚合酶链反应原理的检测方法可以用CT值作为检测值做质控图。 室内质控样本检测模式 NAT质控样本检测原则 应与常规样本等同对待，混样核酸检测系统不能采用单样本检测模式。 混样检测系统采用模式 质控样本与已知NAT阴性样本混样检测的模式，即符合质评样本按常规样本对待的原则，并且节约试剂成本，不影响血液放行速度。 室间质评活动 能不能对EQA样本特殊对待？ 能不能与别的实验室对结果？ 甚至直接采用厂家的结果？ 在收到室间质评样品后，按要求进行保存，使用时完全融化平衡至室温，混匀，若有絮状物离心后取上清液。在规定的时间内，与待测标本起一 起，按照本实验室常规方法对每个批号的质评样品进行测定，记录结果， 并按时上报。 室间质评样本检测模式 室间质评样本的混样核酸检测 室间质评样本与待检样本混样检测：混样无反应性报阴性；有反应性进行拆分检测。 室间质评样本与 NAT阴性样本混样检测：混样无反应性报告阴性；反应性只对室间质评样本进行单样本检测。 室间质评证书 我站每年参加省、国家临检中心组织的室间质评活动各两次。 室间质量评价对实验室的质量改进作用： 出现检测结果不符问题－ 寻找原因并评估对血液标本的检测错误风险－采取措施进行改进（仪器设备、试剂、人员操作流程等） 实验结果分析 检测结果的分析和检测结论的判定应由经过培训和评估可以胜任并得到授权的技术人员进行。 查看阴阳性对照、室内质控是否正常，判定整批实验的有效性 查看各孔内对照是否在一定的CT范围，判定单孔实验的有效性 观察各孔有反应性、无反应性、有效、无效或