苦参碱对人食管癌细胞株Eca-109增殖和凋亡地影响.pdf

细胞、肺癌A549细胞和肝癌HepG2细胞凋亡，且其诱导凋亡的作用随苦参碱的 浓度增加而增加“3。体外0．89／L苦参碱处理3d就能明显抑制人肝癌细胞株 (HepG2)的增殖，1．59／L可明显诱导其凋亡口1。有研究提示苦参碱可克服肿 瘤的多药耐药现象， 有可能成为一种理想的中药抗肿瘤制剂阳1。还有的学者试 图从基因水平来阐述苦参碱对白血病细胞诱导分化作用的机制，认为从中药和 天然药物中寻找和提取诱导分化剂来进行肿瘤细胞的诱导分化治疗可能是一种 新的抗肿瘤治疗途径睁1。有研究表明，苦参碱可明显抑制肿瘤细胞与内皮细胞 粘附后CD44、CD49粘附因子的表达，从而抑制了肿瘤细胞与内皮细胞的粘附， 减少了肿瘤的转移n伽。王涌等n11研究发现苦参碱可上调细胞粘附调节基因 CARmRNA在人肝癌细胞系Bei-7404中的表达，进而影响细胞信号转导通路，最 终降低肿瘤细胞的侵袭转移能力，可能是苦参碱诱导分化的重要机制：另外， 对肿瘤细胞周期变化的影响也是苦参碱诱导分化的可能机制之一。林洪生等n明 研究表明，一定浓度苦参碱可明显抑制Tiaml基因的表达，通过这种控作用可 以降低肿瘤细胞的粘附和迁移，从而对一些肿瘤的浸润和转移产生一定的抑制 作用。虽然苦参碱对肺腺癌、前列腺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌、白血病细胞的 体外抑制作用都有相应的研究，并有部分阐述了一定的分子机制，但是苦参碱 对食管癌细胞的抑制作用研究以及分子机制的探讨在国内却并不多见，氧化苦 参碱对食管癌细胞的作用研究相对多一些。 本论文以人食管癌细胞株(Eca-109)为研究对象，采用MTT比色法、 Hoechst33342染色法以及流式细胞分析来探讨中药提取物苦参碱单体对 同浓度苦参碱(0．5、1．0、2．0、4．0、8．Omg／m1)处理24h和经固定浓度苦参 碱(2．0 mg／m1)处理不同时间(0、12、24、36、48h)后的细胞增殖存活率。 结果表明，苦参碱在体外对Eca-109具有明显的存活抑制作用，它们的增殖存 活率与苦参碱呈剂量一时间依赖关系。随着苦参碱的浓度增加和处理时间的延 长，其对Eca-109的抑制增殖作用越强，细胞增殖存活率越低。为了探讨苦参 光显微镜观察和AnnexinV／Pl双染经流式细胞仪检测相结合的方法，研究证实 苦参碱可以有效诱导Eca-109发生凋亡，而且凋亡细胞的数量随苦参碱处理时 Ⅱ 间和作用浓度的增加而增加，表现出明显的时间一剂量依赖关系。同时，我们还 采用PI单染经流式细胞仪检测的方法，研究证实苦参碱可以有效诱导Eca-109 发生细胞周期G2期阻滞。 综上所述，本论文的研究结果证实了苦参碱具有抑制Eca-109存活增殖及 诱导凋亡发生的能力，以及苦参碱诱导Eca-109发生细胞周期G2期阻滞，表明 苦参碱抑制Eca-109细胞增殖以及诱导其发生凋亡的机制可能与其诱导 Eca-109发生细胞周期G2期阻滞有关，这为我们研究苦参碱诱导人食管癌细胞 株发生凋亡的分子机制提供了一个新的思路和方向。通过这些研究，阐明了苦 参碱在体外对Eca-109存活增殖的抑制作用和诱导凋亡作用，通过细胞周期阻 滞给我们未来的研究提供了新的思路，从而为其作为抗食管癌药物开发奠定了 一定的理论基础。 关键词：苦参碱食管癌细胞增殖凋 ⅡI Abstract the Carcinomaof isoneofcommon tumorsfromhuman esophagus malignant itisaseriousthreattohuman than20 digestivesystem,and health．Every year，more million diedof Chinaeach deathof15million people esophagealcancer,in year the ofthe