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一、目视比色法 用眼睛比较溶液颜色的深浅以确定物质浓度的方法称为目视比色法。 特点：设备简单、操作简便；无需单色光；准确度不高。 二、分光光度计 （一）基本组成 2.单色器 3. 样品室 4. 检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。 1、显色反应 2、显色反应条件的选择 3、测量条件的选择 4、提高光度测定灵敏度和选择性的途径 一、显色反应 首先 显色 有色化合物 测定 使无色或浅色的待测组分转变为有色化合物的反应称为显色反应。与待测组分形成有色化合物的试剂成为显色剂。 如 Mo5+ + 5CNS- Mo（CNS）5 桔红色 Fe3+ + CNS- Fe（CNS）2+ 血红色 显色反应可以是络合反应、氧化还原反应、有机合成反应等 目的：提高分析的灵敏度和准确度 1、原则： （1）、显色反应的灵敏度要高 （2）、显色剂的选择性要好 （3）、有色化合物的稳定性要高 （4）、有色化合物的组成要恒定 （5）、显色剂本身的颜色与有色化合物的颜色差别要大 要求△? 60nm。 2.显色剂 OO 有机显色剂的选择性、灵敏度均较高。 生色团：含不饱和键的基团，能吸收＞200 nm 波长的光 广义生色团 如： N=N C=O N=O （偶氮基） （羰基） （亚硝基） C=S N （硫羰基） （硝基） 助色团：含孤对电子的基团，与生色团上的不饱和键相互作用 颜色加深 如： NH2 R2N OH 例：1、磺基水扬酸 很多高价金属离子 螯合物，主要用于测定Fe3+ Fe3+ + FeSal+ 红褐色 pH 2~3 Fe(Sal) 2 - Fe(Sal) 3 3- Fe(OH)3 褐色 黄色 沉淀 pH 4~9 pH9~11.5 pH＞12 FeSal+ λmax= 520nm ε=1.6×103 2、丁二酮肟 测 Ni 2+ 十分有效的试剂 Ni 2+ + 红色配合物 λmax = 470 nm ε= 1.3×104 3、邻二氮菲 （邻菲啰啉 、邻二氮杂菲） 测 Fe2+ 较好的试剂 Fe2+ + 橙红色 pH 3~9 λ max = 508 nm ε= 1.1×104 4、二苯硫腙 测 Cu2+、Pb2+、Zn2+、Cd2+、Hg2+ 等重金属离子的重要试剂 采用控制酸度及掩蔽的办法，可消 除重金属离子之间的干扰，反应的灵敏 度是很高的。 Pb2+ + 红褐色 λ max = 520 nm ε= 6.6×104 二、显色反应条件的选择 吸光度A与显色剂用量CR的关系会出现如图所示的几种情况。选择曲线变化平坦处。 2. 反应体系的酸度 (1)酸度对显色剂本身颜色的影响 酸碱指示剂的性质，在不同的酸度下， 显不同的颜色 如：偶氮胂 Ⅲ 在 pH＞4时 呈紫色 碱性 呈兰色 pH≤3 玫瑰红色 ∴ ZrO
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