分子发光光谱法.pptVIP

某些物质的分子吸收一定能量后，电子从基态跃迁到激发态，以光辐射的形式从激发态回到基态，这种现象称为分子发光，在此基础上建立起来的分析方法为分子发光分析法。 根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类： 光致发光：以光源来激发而发光 化学发光：以化学反应能激发而发光—化学发光分析法 电致发光：以电能来激发而发光—原子发射光谱法 生物发光：以生物体释放的能量激发而发光 二、分子荧光分析法的特点 1. 灵敏度高 荧光强度随激发光强度增强而增强（提高激发光强度，可提高荧光强度 2. 选择性好 不同的物质用不同的光进行激发，选择不同的激发光波长 不同的物质发射的荧光不同，选择不同的检测荧光波长 比较容易排除其它物质的干扰，选择性好 3. 实验方法简单 4. 待测样品用量少；仪器价格适中；测定范围较广 具发光强度可定量测定许多痕量的无机物和有机物，广泛应用在生物化学、分子生物学、免疫学及农牧产品分析、卫生检疫等领域。 荧光法比磷光法应用广泛，不如分光光度法 物质只有吸收了紫外可见光，产生? ? ?* n ? ?*跃迁，产生荧光 ? ? ?*与n ? ?*跃迁相比，摩尔吸收系数大，寿命短 ? ? ?*跃迁常产生较强的荧光， n ? ?*跃迁产生的荧光弱，但可产生系间窜跃，产生更强的磷光 一般情况，有机芳香族化合物及金属离子配合物是最强最有用的荧光体 具有共轭体系的芳环或杂环化合物， ?电子共轭程度越大，越易产生荧光; 环越多，共轭程度越大，产生荧光波长越长，发射的荧光强度越强 2. 刚性平面结构——— 较稳定的平面结构 具有强荧光的分子多数有刚性平面结构 例 1，2 - 二苯乙烯 3. 金属螯合物的荧光 大多数无机盐类金属离子，不能产生荧光，但某些螯合物都能产生很强的荧光，可用于痕量金属离子的测定 不少有机配体是弱荧光体 或不发荧光，但与Mn+形成螯合物后变为平面构型，就会使荧光加强或产生荧光 例：8-羟基喹啉为弱荧光体，与Mn+— Al3+、Mg2+形成螯合物后，能形成刚性结构，荧光加强 4. 取代基的类型 对荧光物质的荧光特征和强度也有很大影响。分成三类： （1）增强荧光的取代基 —— 有 -OH、-OR、 -NH2、 -NHR、-NR2等给电子基团 由于基团的 n 电子（孤对电子）的电子云与苯环上的 ? 轨道平行，共享了共轭 ? 电子，扩大了共轭体系，使荧光波长长移，荧光强度增强 （2）减弱荧光的取代基 ——-COOH 、 -NO2 、-COOR 、 -NO、-SH 吸电子基团, 使荧光波长短移，荧光强度减弱 （3）影响不明显的取代基 —— -NH3+、-R、- SO3H等 (4) 芳环上被F、Cl、Br、I 取代后，使系间窜跃加强，磷光增强，荧光减弱。其荧光强度随卤素原子量增加而减弱，磷光相应增强，这种效应为重原子效应。 (5) 取代基位置—— 对位、邻位取代增强荧光，间位取代抑制荧光。 四、环境对荧光、磷光的影响 1. 溶剂的影响 同一荧光物质在不同的溶剂中可能表现出不同的荧光性质，一般来说，溶剂的极性增强，荧光波长长移，荧光强度增大 3. pH的影响 大多数含有酸性或碱性基团的芳香族化合物的荧光性质受溶液pH的影响很大。 共轭酸碱对是具有不同荧光性质的两种型体，具有各自的荧光效率和荧光波长。 但两个苯环相连的化合物，又表现出相反的性质，分子形式无荧光，离子化后显荧光 五、荧光强度与荧光物质浓度的关系 用强度为I0的入射光，照射到液池内的荧光物质时，产生荧光，荧光强度If 用仪器测得，在荧光浓度很稀 (A0.05)时，荧光物质发射的荧光强度If 与浓度有下面的关系 If = ?f Ia= ?f （I0- I ） 当A﹤0.05时，方括号中其它各项与第一项相比可忽略不计，上式简化 If = 2.3 ?f I0A =2.3 ?f I0 ?bc 荧光强度与物质浓度呈线形关系，If=KC只有在浓度低时使用，荧光物质测定的是微量或痕量组分，灵敏度高。 浓度高时， If与C不呈线形关系，有时C增大， If反而降低因为公式[ ]中后面影响，有时发生荧光猝灭效应。 （一）荧光分析仪器——主要由光源、单色器、液槽、检测器和显示器组成 1、光源 激发光源一般要求比吸收测量中的光源有更大的发射强度；适用波长范围宽 荧光光度计中常用高压汞灯和氙弧灯 2、单色器 大多数荧光光度计一般采用两个光栅单色器，有较高的分辨率，能扫描图谱，既可获得激发光谱，又可获得荧光光谱 第一单色器作用：分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长? ex ，用此激发光激发液池内的荧光物质 ? ex。 第二单色器作用：滤掉一些杂散光和杂质所发射的干