总RNA提纯试剂盒.doc

总RNA提纯试剂盒 操作步骤 准备 估算Redzol或组织细胞的用量。每1ml Redzol的组织用量为50~100mg；细胞用量为5~10×106个细胞 组织或细胞的裂解 贴壁细胞 吸尽培养液，加入Redzol，用移液器反复吹打数次，确保全部裂解，然后转移至新的离心管中。裂解10cm2细胞需要1ml Redzol。 注：Redzol的加入量不是根据细胞数目来决定，而是根据细胞培养皿的面积（10cm2/ml）来决定。 悬浮细胞 离心收集细胞，吸尽液体，加入Redzol用移液器吹打数次，确保全部裂解（某些酵母和细菌要用匀浆器匀浆才能全部裂解），然后转移至新的离心管中。按1ml Redzol可裂解5~10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞的比例加入Redzol裂解细胞。 注：应避免在Redzol加入前洗涤细胞，这样会增加mRNA降解的几率。 组织 先将新鲜组织剪成小块，放入匀浆器内，加入Redzol用匀浆器匀浆，然后转移至新的离心管中。或者将组织在液氮中研磨成粉末后，加入Redzol中。每50~100mg的组织加入1ml Redzol进行裂解。 注：样品总体积不要超过所用Redzol体积的10%。 分相 a. 将匀浆液15~30℃ b. 每1ml Redzol中加入0.2ml的三氯甲烷（氯仿），震荡混匀后15~30℃静置2~ c. 12,000rpm离心15分钟。离心后混