F488-95水中细菌总数的试验方法.docVIP

PAGE PAGE 6 编号：F 488-95 水中异养细菌现场筛选的标准试验方法 1. 适用范围 1.1 本筛选试验方法涉及用特殊设计的工业仪器检测和计算水样中的细菌。本试验方法只适用于计算在特定试验条件下（例如：介质、温度、时间等）有生存力的细菌。但不适用于厌氧菌的检测。 1.2 没有能够计算一个样品中所有的有生存力的细菌数量的细菌培养技术，因为细菌通常是以单一、成对、链状、或群落形式存在，并且没有任何一组生长条件或介质能够满足样品中所有细菌的生理要求。因此，本试验方法不能提供总体细菌的计算，但是能够努力去实现样品中的有生存力的需养细菌和兼性需养细菌的计算。 1.3 本试验方法适用于样品或样品稀释液中培养细菌数量每毫升10-160个的操作。 1.4 本试验方法设计用于在细菌生物实验室还未准备就位的情况下作为一个简化的现场试验方法。 1.5 本标准对所有的安全事项不做阐述，如果有，也是有关于本标准的使用方面的。本标准的用户有责任建立起与之相适应的安全和健康规范，并在使用本标准前确定规章制度限制的适用性。 2. 参考文献 2.1 ASTM标准： D 1129 与水有关的术语 D 1193 试剂水技术规范 D 3370 从密闭水道中取水样的实践 3. 专用术语 3.1 定义： 3.1.1 本试验方法中所使用的词条定义请参见“术语D1129”。 3.2 本标准特定词条的定义： 3.2.1 动态系统：容纳流动水的系统或容器。 3.2.2 估计细菌数量：1.0毫升水样中的细菌数量，运用本试验方法中描述的技术能够培养成单一的可数菌落。 3.2.3 静态系统：容纳非流动水的系统或容器。例如：装在瓶里或储存罐里的水。 3.2.4 CFU：菌落形成单位（colony forming units）。 3.2.4.1 评述：以泵驱动水循环系统和流水净化管线做示例。 4. 试验方法概要 4.1 把工业用取样器（SPC取样器）浸入水样中。1.0毫升量的水会自动通过一个0.45um孔度的细菌保持隔膜过滤器进入到用吸水材料制成的衬垫里。密封在过滤器背面的吸水衬垫含有脱水培养基介质，介质在通过过滤器时水合渗出。然后细菌被圈围到过滤器的表面，取样器开始培养细菌，使其逐渐成长成为可见的菌落。可直接计算菌落数量或使用低倍放大镜进行计算。 4.2 对于高细菌数含量的样品，在进行上述4.1试验之前需用适当的稀释液进行稀释。 5. 用途及重要性 5.1 本试验方法为系统中的细菌污染源的确定提供了鉴别方式。 5.2 本方法是一种筛选试验方式，只限用于对系统中的细菌污染程度（水平）进行估计。本试验方法旨在为估计水样中的细菌数量提供一项简单的现场技术。由于本方法使用的是1ml样品，所以不具有统计意义，除非可培养细菌量大于10cfu/ml。 5.3 本试验方法适用于水中可培养的需养细菌和兼性需养细菌的检测。 6. 仪器设备 6.1 易耗品 6.1.1 SPC取样器：一种提前消毒的细菌现场试验仪器，由0.45um孔度的细菌保持隔膜过滤器和带有如下描述的脱水培养基介质的吸水衬垫组成。过滤器和培养基介质吸水衬垫被一起封在一个桨状塑料架里（见图1），带有整装细菌培养器。 6.1.1.1 M-HPC培养基配方（SPC取样器） （1）胨，2.0克 （2）明胶，2.5克 （3）甘油，1.0毫升 （4）水，100毫升 6.2 以下仪器只有在评价高细菌数含量水样（细菌数大于100/ml）而用到稀释液时才可使用。 6.2.1 广口取样瓶：容量为至少300ml的容器，带有丝扣盖。取样瓶应能够保存细菌成分，用硼硅玻璃或其他材料制成，能够适应传统消毒程序。 6.2.2 稀释瓶：由硼硅玻璃制成，带丝扣盖的耐高压瓶，100毫升容量。 6.2.3 量筒：硼硅玻璃材质，10毫升和100毫升，经消毒。 6.2.4 滴管：经消毒，可处理，带刻度，塑料或玻璃材质，1毫升容量。 6.3 依照实践D 3370 中13.2.1和13.2.2节的步骤，对广口取样瓶和稀释瓶进行清洁和消毒。 7. 试剂和材料 7.1 试剂的纯度：试剂级的化学药品可用于所有的试验。除非另有说明，所有的试剂应符合美国化学协会分析试剂委员会提出的规范标准。 7.2 水的纯度：除非另有说明，水的标准应为试剂水，符合D 1193，III类的规范。 7.3 稀释水 7.3.1 磷酸盐缓冲溶液，库存料：将34.0克的磷酸二氢钾（KH2PO4）溶于500毫升的水中。用浓度为40克/升的氢氧化钠（NaOH）溶液调整pH值到7.2，并加水至1000毫升。用0.22um孔度的过滤器过滤消毒，或做热压处理15分钟温度121℃。放入冰箱储存并保持无菌状态。如果有浑浊或其他杂质出现，丢弃储存。pH值的明显改变说明溶液已被污染。允许的pH值为7.2±0.1。 7.3