基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的获取 (2) (3)将目的基因导入受体细胞 (4)目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 1、目的基因:主要指的是编码蛋白质的结构基因,也可以是一些具有调控作用的因子。 2、获取方法: (1)从基因文库中获取目的基因; (2)利用PCR技术扩增目的基因; (3)通过DNA合成仪用化学方法直接合成 (一)从基因文库中获取目的基因 1.什么叫基因文库? 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断,导入到受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。 基因表达的计算 在真核生物中,对应的是 的碱基数 基因组文库的构建模式图 (2)反转录法(cDNA文库的构建方法) 以目的基因转录成的信使RNA为模板,再反转录酶的催化下反转录成互补的单链DNA,然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA,即cDNA,从而获得所需的基因。 思考1: 表达载体为什么一定要有启动子? (1)生物之间进行基因交流,只有使用受体生物自身基因的启动子才能有利于基因的表达; (2)通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子,只将编码序列导入受体细胞无法转录。 思考2:终止子的作用是什么? 终止子是位于基因尾端的一段特殊的DNA片断,能终止mRNA的转录。 基因工程技
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